MicroRNA有潜力解决肾癌治疗难题

为解决 ccRCC 治疗难题，加拿大蒙克顿大学的研究人员开展 miR-2355-5p 在 ccRCC 中作用的研究，发现其促进肿瘤生长和血管生成，有望为 ccRCC 治疗和诊断提供新方向。

　　

在癌症的世界里，肾癌一直是个让人头疼的角色。2020 年，全球超过 43 万人被诊断出患有肾癌，其中透明细胞肾细胞癌（ccRCC）最为常见，约占所有肾癌诊断的 70%。对于早期 ccRCC 患者，手术是主要治疗手段，5 年生存率能超 80%。但令人遗憾的是，大约 30% 的患者会发展为晚期转移性疾病，还有三分之一的患者在确诊时就已经出现转移。尽管靶向疗法和免疫疗法取得了一些进展，但晚期转移性 ccRCC 患者的 5 年生存率仍很少超过 20%。所以，深入了解 ccRCC 的发病机制，对改善患者治疗状况至关重要。

加拿大蒙克顿大学（Université de Moncton）等机构的研究人员针对 ccRCC 展开了一系列研究。他们聚焦于 MicroRNA（miRNA，一类约 20 个核苷酸长的非编码调节 RNA），发现了 miR-2355-5p 在 ccRCC 中的关键作用，这一研究成果为 ccRCC 的治疗和诊断开辟了新方向。该研究成果发表于《Cancer Cell International》杂志。

研究人员运用了多种关键技术方法来开展研究。在细胞实验方面，使用了多种 ccRCC 细胞系及人脐静脉内皮细胞（HUVECs）进行培养，并对细胞进行基因编辑和处理。在检测分析技术上，通过下一代测序进行 miRNA 谱分析，利用 RNA 提取和逆转录定量聚合酶链反应（RT-qPCR）对 RNA 进行定量，采用蛋白质免疫印迹（Western blot）分析蛋白质表达。同时，构建小鼠异种移植模型来研究肿瘤生长情况，还从患者处收集血浆和组织样本进行相关检测 。

下面来看具体的研究结果：

• VHL 调节的 miRNA 谱分析：研究人员对 VHL 缺陷的 ccRCC 细胞系 RCC4 及其表达功能性 VHL 蛋白的同基因细胞系 RCC4 VHL 进行小 RNA 测序，发现 352 个 miRNA 中有 75 个差异表达。通过对 ccRCC 患者（TCGA-KIRC 和 CPTAC3 队列）的 miRNA 测序数据进行分析，进一步验证了这些结果。在众多差异表达的 miRNA 中，研究人员聚焦于 miR-2355-5p，发现其在 ccRCC 细胞模型、原发性肿瘤及患者血浆中均过表达，且这种过表达与 VHL 状态相关1。

• miR-2355-5p 过表达的机制：为探究 miR-2355-5p 与 VHL 的关系，研究人员利用 CRISPR/Cas9 系统敲低 786-0 VHL 细胞中的 VHL，结果发现 miR-2355-5p 表达显著增加。进一步研究表明，miR-2355-5p 的过表达是 HIF-2α 依赖的，敲低 HIF-2α 可降低 miR-2355-5p 的表达，而敲低 HIF-1α 则对其无影响。此外，研究还发现 miR-2355-5p 所在的 Kruppel 样转录因子 7（KLF7）基因表达与 miR-2355-5p 正相关，且受 VHL/HIF-2α 调控23。

• miR-2355-5p 对细胞功能的影响：研究人员构建了 miR-2355-5p 敲除（KO）细胞系，发现敲除 miR-2355-5p 后，ccRCC 细胞的集落形成能力、增殖能力显著下降，细胞周期阻滞在 DNA 合成期（S 期）。同时，细胞迁移能力和刺激血管生成的能力也受到抑制。通过蛋白质组分析发现，多种血管生成相关蛋白的表达在敲除 miR-2355-5p 后发生改变45。

• miR-2355-5p 的潜在靶基因：通过 miR-2355-5p 下拉实验和生物信息学分析，研究人员鉴定出 5 个潜在的肿瘤抑制基因，即 ACO1、BTG2、CMTM4、SLIT2 和 WDFY2。这些基因在 ccRCC 患者肿瘤组织中均显著下调，且在 miR-2355-5p 敲除的小鼠异种移植肿瘤中表达增加6。

• miR-2355-5p 对肿瘤生长的影响：小鼠异种移植实验表明，敲除 miR-2355-5p 可显著抑制 786-0 细胞在小鼠体内的肿瘤生长，而过表达 miR-2355-5p 则促进肿瘤生长。这进一步证实了 miR-2355-5p 在 ccRCC 肿瘤发生中的重要作用77。

研究结论和讨论部分指出，VHL 功能缺失是 ccRCC 癌变的重要起始步骤，本研究首次明确证明了 miR-2355-5p 在 ccRCC 中的过表达，且其过表达通过经典的 VHL/HIF-2α 轴发生。miR-2355-5p 在 ccRCC 细胞增殖、迁移、血管生成和肿瘤生长中发挥着关键作用，通过直接靶向多个肿瘤抑制基因来促进肿瘤发展。此外，血浆中循环 miR-2355-5p 的增加表明其有望被纳入未来 ccRCC 的检测指标。从治疗角度看，直接靶向 miR-2355-5p 可显著抑制 ccRCC 肿瘤生长和血管生成，为 ccRCC 的治疗提供了新的潜在靶点和方向。