TrenibotulinumtoxinE?细胞效力测定方法的建立与评价：一种替代小鼠生物测定的新策略

《Toxins》：Evaluation of a Cell-Based Potency Assay for Detection of the Potency of TrenibotulinumtoxinE? (TrenibotE)

本综述系统评价了TrenibotulinumtoxinE?（TrenibotE）细胞效力测定法（CBPA）的验证研究。该方法通过定量人神经母细胞瘤细胞中SNAP25180的切割水平，展现出98%的准确度和6.3%的中间精密度，完全符合药典要求，为BoNT/E（肉毒神经毒素E型）提供了动物实验替代方案，具有重要转化价值。

　　

背景

肉毒神经毒素（BoNTs）是由肉毒梭菌产生的强效天然毒素，其中E型血清型（BoNT/E）因其起效迅速、作用时间短而成为创新药物TrenibotulinumtoxinE?（TrenibotE）的活性成分。传统的效力测定方法小鼠LD₅₀（mLD₅₀）存在特异性不足、通量低及动物伦理问题，因此开发并验证一种新的细胞效力测定法（CBPA）至关重要。

方法

该CBPA方法基于人神经母细胞瘤细胞系（BB10），定量检测BoNT/E切割底物SNAP25₁₈₀的水平。实验流程包括细胞培养与分化、毒素处理、细胞裂解及酶联免疫吸附测定（ELISA）检测。数据分析采用JMP 18软件中的二次平行线模型，评估参数包括准确度、线性、重复性、中间精密度和范围。

结果

准确度：在50%、75%、100%、125%和150%五个效力水平下，总体准确度为98%，各水平准确度均落在85%-115%的接受标准内。

中间精密度：各效力水平的变异系数（CV）为1.36%-7.57%，总体CV为6.28%，符合≤8%（100%水平）和≤13%（其他水平）的标准。

线性：测定值与预期值的斜率為0.942，确定系数（R²）為0.963，截距和均方根误差（RMSE）分别为0.032和0.057，满足斜率0.80-1.25、R²≥0.90的要求。

重复性：在100%效力水平下，重复性CV为2.38%，远低于≤8%的接受标准。

范围：该方法在50%-150%标签声称的范围内均表现出合适的准确度、精密度和线性。

讨论

本研究开发的CBPA方法并非BoNT/A测定方案的简单调整，而是针对BoNT/E独特药理特性（如作用快速、短暂）的必要开发。与mLD₅₀的交叉验证显示，CBPA与mLD₅₀的几何平均效力比值为0.98（90%置信区间0.96-1.00），证实了两种方法的等效性。此外，CBPA在检测温度、紫外光（UV）和冷白光（CWL）胁迫样品的稳定性方面比mLD₅₀更敏感，能更早发现效力下降，体现了其基于作用机制的优势。研究也探讨了使用人诱导多能干细胞（hiPSC）衍生神经元等新型细胞模型的潜力，为未来方法升级奠定了基础。

结论

在受控实验室条件下，该CBPA方法成功通过验证，各项参数均符合预定标准，适用于TrenibotulinumtoxinE?的药品放行检验。其主要局限性在于单中心验证，未来需通过多中心合作研究进一步确认其可转移性和稳健性。该方法的建立为这类生物制品的生命周期管理提供了关键的质量控制工具。