Pitolisant通过外侧缰核组胺信号通路抑制小鼠酒精摄入并改善戒断负性情感

《CNS Neuroscience & Therapeutics》：Pitolisant Inhibits Alcohol Drinking and Improves Withdrawal Negative Affect Through Lateral Habenula Histaminergic Signaling in Mice

本文系统研究了FDA批准的H3R拮抗剂Pitolisant对小鼠乙醇（EtOH）相关行为的作用及机制。研究发现，Pitolisant不仅能抑制急性EtOH诱导的运动激活、条件性位置偏爱（CPP）和镇静效应，还能减少自愿性酒精摄入，并缓解24小时戒断（Post-EtOH）后的焦虑和抑郁样行为。其作用机制与外侧缰核（LHb）内组胺能信号通路、去甲肾上腺素（NE）神经传递以及脑源性神经营养因子（BDNF）/cAMP反应元件结合蛋白（CREB）信号通路的调节密切相关。该研究为组胺能系统作为酒精使用障碍（AUD）潜在治疗靶点提供了新的实验依据。

　　

1 引言

酒精使用障碍（AUD）是一种慢性复发性疾病，以强迫性饮酒和戒断诱导的负性情感为特征。目前的治疗方法疗效有限，迫切需要新的治疗靶点。组胺（HA）作为一种神经递质，参与睡眠-觉醒调节、摄食和认知等功能，其信号通路，特别是通过组胺H₃受体（H₃R）的调节，可能影响酒精相关行为。Pitolisant是首个被FDA批准用于治疗发作性睡病的H₃R反向激动剂，其广泛的神经药理学特征暗示其在癫痫、帕金森病等神经精神疾病中的潜在应用价值。外侧缰核（LHb）是参与厌恶和情绪调节的关键脑区，接收密集的组胺能输入并高表达H₃R。LHb及其下游靶点（如吻内侧被盖核，RMTg）的过度活跃与酒精依赖和戒断诱导的负性情感密切相关。本研究旨在探讨Pitolisant对小鼠酒精相关行为的治疗潜力及其在LHb中的潜在神经机制。

2 材料与方法

研究使用成年雄性C57BL/6J小鼠，通过急性或慢性间歇性酒精暴露模型进行评估。行为学实验包括开放场地试验（OFT）、高架十字迷宫（EPM）、悬尾试验（TST）和蔗糖偏好试验（SPT）等，以评估焦虑和抑郁样行为。采用立体定位手术进行脑内微量注射，免疫荧光和Western blot用于检测cFos和组胺受体表达，液相色谱-质谱联用（LC-MS）用于分析神经递质和代谢物水平。统计分析采用单因素或双因素重复测量方差分析（ANOVA）。

3 结果

3.1 单次全身注射Pitolisant抑制EtOH诱导的运动激活、CPP和镇静效应

研究发现，急性乙醇注射显著增强小鼠 locomotor activity，而Pitolisant（5和10 mg/kg）预处理可剂量依赖性地减弱此效应。在LORR实验中，10 mg/kg Pitolisant显著延迟了乙醇诱导的睡眠潜伏期并缩短了睡眠持续时间。在CPP实验中，Pitolisant预处理显著减少了小鼠在乙醇配对箱中的停留时间，表明其能对抗乙醇的奖赏效应。

3.2 单次Pitolisant注射减少雄性小鼠的自愿酒精摄入

在双瓶选择（2BC）饮酒模型中，急性Pitolisant给药显著降低了24小时内的乙醇摄入量和偏好度。在慢性间歇性访问20%乙醇（IA2BC）模型中，Pitolisant同样表现出剂量依赖性的减少酒精摄入和偏好的效果，且不改变总液体摄入量。

3.3 Pitolisant缓解戒断诱导的负性情感

在戒断24小时后，小鼠表现出明显的焦虑和抑郁样行为。Pitolisant（10 mg/kg）预处理显著改善了OFT中的中心区域停留时间、EPM中的开臂探索时间以及TST中的不动时间，表明其具有抗焦虑和抗抑郁作用。

3.4 中枢给药Pitolisant减轻酒精摄入和戒断诱导的负性情绪

侧脑室（ICV）微量注射Pitolisant显著减少了Post-EtOH小鼠的乙醇摄入和偏好，并缓解了其焦虑和抑郁样行为。cFos免疫反应性细胞计数显示，Pitolisant降低了LHb和内侧前额叶皮层（mPFC）的神经元激活，同时增加了腹侧被盖区（VTA）、伏隔核（NAc）等区域的激活。

3.5 Pitolisant调节Post-EtOH诱导的LHb组胺信号和代谢物水平变化

免疫荧光和Western blot结果显示，乙醇戒断下调了LHb中H₁R、H₃R和组氨酸脱羧酶（HDC）的表达，并降低了磷酸化CREB和BDNF水平。Pitolisant处理恢复了BDNF和pCREB水平，并上调了H₂R表达。LC-MS分析发现，Post-EtOH小鼠LHb中组胺和5-羟色氨酸（5-HTP）水平升高，谷氨酰胺/谷氨酸（Gln/Glu）比值增加。Pitolisant增加了去甲肾上腺素（NE）水平和NE/去甲变肾上腺素（NMN）比值。

3.6 药理学拮抗LHb H₃R减少酒精摄入并缓解戒断负性情感

双侧LHb内注射Pitolisant可减少乙醇摄入并改善戒断负性情感，而联合注射H₂R拮抗剂西咪替丁可阻断此效应，H₁R拮抗剂曲普利啶则无此作用，表明Pitolisant的作用主要通过LHb内的H₂R信号介导。

4 讨论

本研究证明Pitolisant通过拮抗H₃R，调节LHb的组胺能信号通路，有效抑制乙醇奖赏、减少酒精摄入并缓解戒断负性情感。其机制涉及恢复BDNF/CREB信号通路、调节单胺类神经递质代谢以及平衡LHb神经元活动。这些发现突出了组胺能系统在AUD治疗中的潜力，并为Pitolisant的临床转化提供了 preclinical 证据。研究局限性在于仅使用雄性小鼠，未来需纳入雌性个体以探讨性别特异性机制。