促凝细胞外囊泡通过组织因子和蛋白酶激活受体2增加神经元tau蛋白的表达、代谢及其清除过程

《Cellular and Molecular Neurobiology》：Procoagulant Extracellular Vesicles Increase Neuronal Tau expression, Metabolism and Processing Through Tissue Factor and Protease Activated Receptor 2

本研究揭示纤维蛋白原（TF）通过外泌体调控Tau蛋白表达、磷酸化及降解，呈现促进修复与诱导聚集的双重作用。

　　

摘要

神经炎症与神经病理学的发生密切相关，可能由中风、创伤、毒素或感染等因素引发。脑组织中富含组织因子（TF），该因子也会以细胞外囊泡（EV）的形式释放到脑脊液中。TF是一种炎症相关蛋白，在慢性疾病状态下其含量会增加，它能启动血液凝固过程并促进组织修复。本研究探讨了TF对分化的人类细胞SH-SY5Y和HCN-2以及大鼠神经细胞中Tau蛋白的表达、磷酸化、聚集和降解的影响。实验使用了含有TF的囊泡或添加了因子VIIa（fVIIa）的重组TF，并在各种试剂和抗体的存在下进行。用TF或TF-EV处理这些分化细胞可上调Tau mRNA和蛋白的表达，且重复处理效果更显著。将细胞与TF-fVIIa共培养可增加Tau蛋白的表达，并在Thr181位点引发显著的磷酸化反应，而在Ser202位点的磷酸化程度较低。通过抑制TF-fVIIa的蛋白酶活性或使用SAM11抗体阻断PAR2受体激活，可以减少Thr181位点的Tau蛋白磷酸化。治疗后不同时间点对Tau蛋白的检测表明：Thr181位点的磷酸化产物出现在约50 kDa和30–35 kDa的条带中，而Ser202位点的磷酸化产物则与43 kDa的条带相关。单独使用TF处理细胞即可诱导Tau蛋白的PKC依赖性磷酸化。长期用TF处理分化的SH-SY5Y细胞会导致Tau蛋白与Amytracker染料的结合程度增加。最后，用TF-fVIIa对全长重组Tau蛋白进行可控消化后，得到了更小的蛋白质片段。综上所述，我们的数据揭示了TF影响神经元中Tau蛋白代谢的潜在机制，这些机制既有促进Tau蛋白清除和再生的积极作用，也可能导致其聚集等不利后果。