《Chemistry & Biodiversity》：Silk Fibroin-Stabilized Lapachol Microemulsion Enhances Antiglioma Activity In Vitro
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本文首次报道了一种基于丝素蛋白（SF）的微乳剂作为拉帕醌（LP）的纳米载体，用于神经胶质瘤治疗。研究表明，与游离LP及拉帕醌纳米乳剂（LPN）相比，SF基微乳剂（LP-SF）具有更高的胶体稳定性、缓释特性（符合Korsmeyer–Peppas模型）及抗增殖活性（对C6和AHOL1细胞的IC50分别降至19.96 μg/mL和1.7 μg/mL）。LP-SF在增强肿瘤细胞杀伤的同时，对正常胶质细胞和红细胞无显著毒性，展现出良好的治疗窗口。该研究为胶质瘤的靶向治疗提供了新型纳米平台。
1 引言
神经胶质瘤是最常见的颅内恶性肿瘤，占恶性脑肿瘤病例的约81%，好发于50-60岁男性。尽管治疗手段不断进步，但由于其高化疗耐药性和现有药物的系统性毒性，治疗仍面临巨大挑战。天然产物因其结构和化学多样性在肿瘤治疗中展现出潜力，其中拉帕醌（LP）作为一种从亚马逊雨林植物Tabebuia impetiginosa中提取的萘醌类化合物，具有广谱抗肿瘤活性（如乳腺癌、前列腺癌、胶质母细胞瘤等），但其水溶性差和治疗剂量下的安全性问题限制了临床应用。近年来，纳米载体（如壳聚糖、纳米乳剂）被用于改善LP的递送效率，通过增强细胞摄取和控制释放（如Korsmeyer–Peppas模型）提升靶向性。
丝素蛋白（SF）来自家蚕（Bombyx mori），因其生物相容性、可调控释放特性及机械稳定性成为理想的药物递送基质。SF纳米颗粒（SFNs）通过β-折叠域形成扩散屏障，可实现药物的缓释，并在胶质瘤治疗中表现出优于聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）和脂质体的细胞杀伤效果。本研究首次构建SF稳定的LP微乳剂（LP-SF），旨在提升LP的溶解度和细胞递送效率，同时保持其安全性。
2 结果与讨论
2.1 LP的理化表征
通过气相色谱-质谱（GC-MS）和核磁共振（NMR）验证LP结构（分子量242 Da）与高纯度（94%）。熔点136–138°C与文献一致，符合后续制剂要求。
2.2 制剂表征与释放动力学
动态光散射（DLS）显示LPN和LP-SF的平均粒径分别为88.3 nm和469.86 nm，多分散指数（PDI）分别为0.29和0.92，表明LP-SF粒径分布较宽但稳定性良好。Zeta电位均为负值（LPN: -31.5 mV；LP-SF: -39.8 mV），证实静电稳定作用；SF的β-折叠网络进一步提供空间稳定。释放实验表明，LP-SF在24小时内累计释放8.6%，初期爆发释放为4.5%，后续符合Korsmeyer–Peppas模型（R2=0.9961），表明其以扩散控制为主。
2.3 抗增殖活性
MTT实验显示，LP-SF对C6（大鼠胶质瘤）和AHOL1（人胶质瘤）细胞的IC50分别为19.96 μg/mL和1.70 μg/mL，显著低于游离LP（44.7 μg/mL和3.15 μg/mL）和LPN（33.9 μg/mL和2.30 μg/mL）。在100 μg/mL浓度下，LP-SF可完全抑制C6细胞增殖；AHOL1细胞在10 μg/mL时即完全失活。细胞形态学变化（如皱缩、脱落）进一步证实其抗增殖效果。
2.4 安全性评估
LP-SF在原发性胶质细胞中未引起显著毒性，且溶血率低于0.1%，表明其具有良好的血液相容性和治疗窗口。与游离LP相比，SF的包封有效降低了脱靶毒性。
3 结论
LP-SF通过SF的稳定作用和缓释特性，显著增强了LP的抗胶质瘤活性，并具备优越的安全性。后续研究将聚焦于体内药代动力学、血脑屏障穿透性及机制探索（如凋亡、氧化应激通路），以推动其临床转化。
4 实验方法
LP从Tabebuia impetiginosa木屑中提取，经柱色谱纯化。SF溶液通过Na2CO3脱胶和CaCl2/乙醇溶解制备。LP-SF由SF溶液、吐温80和LP在异丁醇中超声乳化制得。细胞实验采用MTT法，溶血实验以Triton X-100为阳性对照。数据以均值±标准差表示，统计学处理采用单因素方差分析（ANOVA）和图基（Tukey）事后检验。
