《Hormones & Cancer》：Zerumbone mediated CD1d inhibition suppresses epithelial to mesenchymal transition in triple negative breast cancer
编辑推荐：
本研究针对三阴性乳腺癌（TNBC）高转移性难题，探索CD1d分子在调控上皮-间质转化（EMT）中的作用。研究人员通过姜黄酮（ZER）抑制CD1d表达，发现其可下调波形蛋白（vimentin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）等EMT标志物，同时上调E-钙黏蛋白（E-cadherin），逆转TNBC细胞的迁移和黏附能力。分子对接与动力学模拟证实ZER与CD1d稳定结合（-8.13 kcal/mol）。该研究首次揭示CD1d在TNBC中直接调控EMT的非免疫学功能，为靶向CD1d的天然药物研发提供新策略。
三阴性乳腺癌（TNBC）作为乳腺癌中最具侵袭性的亚型，因缺乏雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）和HER2表达，常对常规疗法产生耐药性，其高转移特性与上皮-间质转化（EMT）过程密切相关。EMT使癌细胞获得迁移和浸润能力，成为肿瘤复发和治疗失败的关键因素。尽管免疫疗法如CAR-T在部分癌症中取得进展，但TNBC的免疫抑制微环境仍使治疗陷入瓶颈。近年来，CD1d分子作为非经典MHC-I类蛋白，虽已知可通过自然杀伤T（NKT）细胞调节免疫应答，但其在肿瘤细胞自身EMT调控中的直接作用尚未明确。
为探索CD1d在TNBC中的非免疫学功能，Ritis Kumar Shyanti团队在《Discover Oncology》发表研究，通过体外实验与计算模拟揭示姜黄酮（Zerumbone, ZER）通过抑制CD1d表达逆转EMT的机制。研究人员以MDA-MB-231和MDA-MB-468两种TNBC细胞系为模型，分别使用CD1d激动剂α-半乳糖神经酰胺（AGC）、胸腺肽α-1（TA）和拮抗剂ZER处理，结合TCGA乳腺癌队列数据，系统评估CD1d对细胞增殖、迁移、黏附及EMT标志物的影响。
关键技术方法
研究采用Western blot和免疫荧光分析CD1d及EMT相关蛋白（vimentin、E-cadherin等）表达；通过Transwell和伤口愈合实验检测细胞迁移；利用实时细胞分析（RTCA）系统动态监测增殖与黏附；借助siRNA敲低CD1d验证功能；基于分子对接（AutoDock Vina）和分子动力学模拟（GROMACS）预测ZER与CD1d的结合模式；整合TCGA-BRCA队列（n=1226）进行生存分析与EMT评分相关性验证。
研究结果
- 1.
CD1d表达与TNBC恶性程度正相关
Western blot显示MDA-MB-231（高侵袭性）的CD1d表达高于MDA-MB-468细胞。AGC与TA处理上调CD1d，而ZER显著抑制其表达（图1B-D）。TCGA数据分析表明，CD1d高表达与EMT特征（vimentin+/N-cadherin+/E-cadherin-）显著正相关（Spearman p=1.5×10-74），且患者总体生存率更低（log-rank p=3.53×10-2）（图8A-B）。
- 2.
CD1d调控细胞增殖与黏附
RTCA实验显示AGC与TA促进细胞增殖和胶原黏附，ZER则抑制这些效应。Western blot及免疫荧光证实 vinculin（黏着斑蛋白）和F-actin在CD1d激活时表达升高，提示细胞骨架重组（图2A-D）。
- 3.
CD1d激动剂增强肿瘤迁移能力
Transwell与伤口愈合实验中，AGC与TA处理组细胞迁移速度加快，ZER组迁移受阻。siRNA敲低CD1d后，细胞迁移能力显著下降，证实CD1d直接参与EMT调控（图3A-E）。
- 4.
ZER通过抑制CD1d逆转EMT表型
Western blot与免疫荧光显示ZER下调间质标志物vimentin、N-cadherin和脂肪酸合酶（FASN），同时上调上皮标志物E-cadherin，诱导间质-上皮转化（MET）。相反，AGC与TA作用相反（图4A-D）。
- 5.
ZER与CD1d具有高亲和结合
分子对接表明ZER与CD1d结合能达-8.13 kcal/mol，关键结合位点为Leu124、Val116和Phe84。100 ns分子动力学模拟显示ZER-CD1d复合物结构稳定（RMSD<1.5 nm），氢键网络持续存在（图5-7）。
结论与意义
本研究突破CD1d仅作为免疫调节分子的传统认知，首次揭示其在TNBC细胞中直接调控EMT的非经典功能。ZER通过特异性抑制CD1d，逆转肿瘤细胞的迁移、黏附等恶性表型，其作用机制得到计算模拟与实验数据双重验证。尽管研究未涉及体内模型及CD1d与NKT细胞的互作，但为开发靶向CD1d的天然药物提供了新方向，尤其对克服TNBC的免疫抑制微环境具有潜在转化价值。未来需进一步探索CD1d下游信号通路及其在肿瘤-免疫双向调控中的复杂角色。
