SFTSV编码的microRNA样小RNA作为新型预后生物标志物在重症发热伴血小板减少综合征中的临床价值

《Emerging Microbes & Infections》：SFTSV-encoded microRNA-like small RNA as prognostic biomarkers in severe fever with thrombocytopenia syndrome

本文首次系统鉴定出SFTSV编码的microRNA样小RNA（milRNA）在重症患者血清中特异性高表达，通过多阶段临床研究证实其与多器官功能障碍（MOD）阶段显著相关，ROC曲线分析显示三分子标志物组合（S-1480/M-692/L-4706）的AUC值达0.8432，显著优于传统血液指标，为SFTS早期风险分层提供了高特异性无创检测新策略。

　　

ABSTRACT

重症发热伴血小板减少综合征（SFTS）是由SFTS病毒（SFTSV）引起的高致死性传染病。本研究通过170例确诊患者、40例其他感染患者和80例健康对照的多阶段研究，首次在SFTS患者血清中鉴定出三种SFTSV编码的microRNA样小RNA（milRNA）：SFTSV-S-1480（S-1480）、SFTSV-M-692（M-692）和SFTSV-L-4706（L-4706）。这些milRNA在重症患者血清中显著升高，而在轻症患者和健康对照中几乎检测不到。

引言

SFTS作为一种新发致命传染病，其致病机制尚不明确，缺乏特异性抗病毒药物。早期识别不良预后对临床干预至关重要。近年研究发现病毒可编码milRNA，本研究旨在探索SFTSV编码milRNA在疾病预后评估中的价值。

结果

临床特征

研究纳入170例SFTS患者，平均年龄63.92岁，重症组111例。重症患者入院时高热、干咳、呕吐等症状显著差异。

SFTSV编码milRNA的鉴定

小RNA深度测序显示重症患者血清中存在57种SFTSV来源milRNA（1586条 reads），显著多于轻症组（6种序列，382条 reads）。病毒小RNA长度主要分布在22±1核苷酸，且以正链为主。通过qRT-PCR验证的26个milRNA中，20个在重症组表达显著差异。TA克隆实验最终确认12个milRNA，选取9个C_T值<35的进行进一步验证。

标志物验证

三分子标志物（S-1480、M-692、L-4706）在重症组血清中浓度显著升高，检测灵敏度达0.01 attomole。Northern blot验证其特异性表达。细胞转染实验证实这些milRNA可由病毒基因组指导合成，小鼠感染模型显示其表达与疾病进展动态一致。

诊断效能评估

ROC分析显示三分子组合区分重症/轻症的AUC达0.8432，显著优于中性粒细胞计数（0.5578）、淋巴细胞计数（0.5887）等传统指标。在MOD阶段，三分子组合预测死亡的AUC高达0.9889，优于C反应蛋白（CRP）、乳酸脱氢酶（LDH）等临床指标。

预后价值

生存分析显示高表达milRNA患者生存期显著缩短。多因素Cox回归证实milRNA是独立预后因素。序列分析显示这三个milRNA编码区域在东亚流行毒株中高度保守。

讨论

本研究首次揭示SFTSV编码milRNA与疾病严重程度的相关性。其可能在病毒免疫逃逸中发挥作用，但具体机制需进一步研究。与传统生物标志物相比，病毒编码milRNA具有更高特异性，为SFTS精准医疗提供新思路。

方法

研究经南京大学医学院附属鼓楼医院伦理委员会批准（2022-238-02）。血清样本通过Trizol法提取RNA，小RNA测序由华大基因完成。qRT-PCR采用茎环法，TA克隆使用5分钟快速克隆试剂盒。细胞实验采用HEK293T和THP-1细胞系，通过脂质体转染和电穿孔导入病毒基因组片段。统计学分析使用GraphPad Prism 9和SPSS 25软件。

该研究通过多中心临床验证确立了SFTSV编码milRNA作为预后生物标志物的临床价值，为早期干预提供了重要依据。