《Frontiers in Immunology》：METTL3 inhibition alleviates neuroinflammation and apoptosis by reducing ETV4 m6A modification
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本文揭示了脑出血(ICH)后小胶质细胞中METTL3介导的m6A修饰通过稳定转录因子ETV4 mRNA，激活NF-κB通路并诱发细胞凋亡的新机制。研究结合测序技术发现IGF2BP2作为m6A阅读器参与调控，为靶向METTL3-ETV4轴治疗ICH提供了理论依据。
引言
表观遗传修饰在基因表达调控中发挥关键作用，其中信使RNA(mRNA)的N6-甲基腺苷(m6A)修饰是真核生物中最常见的内部化学修饰。这种动态可逆的修饰由甲基转移酶（如METTL3-METTL14-WTAP复合物）、去甲基化酶（FTO、ALKBH5）和识别蛋白（YTHDF家族、IGF2BPs）共同调控，影响RNA剪接、稳定性及翻译效率等过程。
脑出血(ICH)作为致命的脑血管疾病，其病理机制涉及血肿扩张、氧化应激及神经炎症级联反应。小胶质细胞作为中枢神经系统的免疫哨兵，在ICH早期通过吞噬作用发挥保护功能，但持续激活会转化为促炎性M1表型，释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)等因子加剧继发性脑损伤。近年研究发现m6A修饰参与ICH病理调控，但具体时空调控机制尚不明确。
结果
脑出血病理刺激触发小胶质细胞METTL3上调
通过胶原酶IV诱导的小鼠ICH模型发现，脑组织中整体m6A修饰水平显著升高（图1B）。qPCR和蛋白印迹显示METTL3在mRNA和蛋白水平均明显上调（图1C-E），免疫荧光证实METTL3在CD45+/CD11b+小胶质细胞中特异性高表达（图1F-H），表明METTL3是驱动ICH后m6A升高的关键因子。
c-Jun转录激活METTL3表达
在氧合血红蛋白(OxyHb)诱导的ICH细胞模型中，转录因子c-Jun的表达上调早于METTL3（图2C-G）。通过siRNA干扰和质粒过表达实验验证，c-Jun可直接调控METTL3转录活性（图2I-L），多重免疫荧光显示二者在小胶质细胞核内共定位（图2H），提示c-Jun是METTL3的上游调控因子。
METTL3促进小胶质细胞炎症反应
在OxyHb刺激的BV2小胶质细胞中，METTL3敲减可降低m6A水平（图3A），并抑制TNF-α、IL-1β、IL-6等促炎因子表达（图3C）；而过表达METTL3则加剧炎症反应（图3D）。进一步实验发现METTL3通过增强NF-κB p65亚基Ser536位点磷酸化（图3E-F）激活炎症通路。
METTL3通过m6A修饰靶向调控ETV4
MeRIP-seq和RNA-seq联合分析发现，转录因子ETV4的mRNA 3'UTR区域存在METTL3依赖性m6A修饰（图4A-E）。MeRIP-qPCR证实OxyHb刺激后ETV4的m6A修饰增加，且可被METTL3敲减低（图4F-G）。蛋白印迹显示METTL3调控ETV4蛋白稳定性（图4H-I），免疫荧光显示ETV4与METTL3、c-Jun在细胞核内共定位（图4J）。
IGF2BP2以m6A依赖方式增强ETV4 mRNA稳定性
通过siRNA筛选发现IGF2BP2敲减可显著降低ETV4表达（图5D-I）。RNA免疫共沉淀(RIP)实验证实IGF2BP2直接结合ETV4 mRNA（图5J-K），表明IGF2BP2作为m6A阅读器稳定ETV4转录本。
METTL3-ETV4轴调控小胶质细胞凋亡
流式细胞术显示ETV4敲减使OxyHb诱导的早期凋亡率从24.5%降至15.5%，而METTL3过表达可逆转该保护效应（图6A-B）。Cleaved Caspase-3荧光染色进一步验证该轴通过激活凋亡执行蛋白加剧细胞死亡（图6C）。
讨论
本研究首次揭示METTL3-m6A-ETV4-IGF2BP2轴在ICH中的调控作用：c-Jun驱动的METTL3上调通过增强ETV4 mRNA稳定性，促进NF-κB通路介导的神经炎症和Caspase-3依赖性凋亡。尽管BV2细胞模型难以完全模拟体内微环境，但实验为靶向m6A修饰治疗ICH提供了新思路。未来需通过动物模型验证该轴的治疗潜力，并探索ETV4下游转录靶点网络。
