《Biochemistry and Biophysics Reports》：Heat-induced antigen retrieval by using Tris-EDTA solution destroys nuclear structure in certain tissues
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本研究针对Tris-EDTA缓冲液（pH 9.0）在热诱导抗原修复（HIAR）过程中可能对特定组织核结构造成破坏的问题，系统评估了其对小鼠和人类组织中核抗原与非核抗原检测的影响。结果发现，Tris-EDTA HIAR会导致甲状腺、肺和肾脏组织出现核内容物泄漏，进而影响核抗原的检测效果，而柠檬酸盐缓冲液（pH 6.0）则可有效保护核形态。该研究为临床诊断和科研中优化抗原修复策略提供了重要依据。
在病理诊断和生物医学研究中，免疫组织化学（Immunohistochemistry, IHC）是一项至关重要的技术，它通过特异性抗体标记组织中的抗原，帮助医生和研究人员识别疾病标志物、分析细胞状态。然而，福尔马林固定石蜡包埋组织时常导致蛋白质交联，掩盖抗原表位，使得抗体难以结合。为解决这一问题，热诱导抗原修复（Heat-Induced Antigen Retrieval, HIAR）技术应运而生，通过高温处理暴露被掩盖的抗原。其中，Tris-EDTA缓冲液（pH 9.0）因其高效的抗原修复能力而被广泛应用。但近年来，有报道指出该缓冲液可能对某些组织的细胞核结构造成破坏，影响核抗原的检测准确性。这一现象是否具有普遍性？其背后的机制是什么？针对这些问题，王海珍等人开展了一项系统研究，成果发表于《Biochemistry and Biophysics Reports》。
为全面评估Tris-EDTA HIAR的影响，研究团队选取了小鼠和人类多种组织样本，包括甲状腺、肺、肝、睾丸、卵巢和肾脏。人类组织来源于医院病理科存档的手术标本，每类组织取自6例患者。通过DAPI染色、苏木精染色、免疫组织化学和免疫荧光等技术，对比分析了Tris-EDTA与柠檬酸盐缓冲液（pH 6.0）在不同抗原修复条件下的效果。
研究结果
3.1. Tris-EDTA HIAR对组织核形态的影响
DAPI染色结果显示，Tris-EDTA HIAR处理后，甲状腺、肺和肾脏组织出现明显的核形态破坏，表现为核碎片化和空泡化，核内容物泄漏。而肝、睾丸和卵巢组织核形态保持完整。这表明Tris-EDTA HIAR对核结构的破坏具有组织选择性。
3.2. 柠檬酸盐HIAR对Tris-EDTA敏感组织核形态的影响
与Tris-EDTA处理组相比，柠檬酸盐缓冲液处理的甲状腺、肺和肾脏组织核形态保持完整，染色均匀，核抗原检测效果良好。说明柠檬酸盐缓冲液在保护核结构方面优于Tris-EDTA。
3.3. Tris-EDTA HIAR对核抗原检测的影响
免疫组织化学和免疫荧光结果显示，在甲状腺、肺和肾脏组织中，Tris-EDTA HIAR导致核抗原（如H2AX、TTF-1、PAX-8）检测信号减弱、定位异常甚至完全丢失。而柠檬酸盐缓冲液处理组核抗原检测效果稳定、背景清晰。
3.4. Tris-EDTA HIAR对非核抗原检测的影响
尽管Tris-EDTA HIAR对核抗原检测不利，但对非核抗原（如Beta-Actin、TG、E-cadherin、EGFR）的检测效果优于柠檬酸盐缓冲液，表现为更强的信号和更高的灵敏度。
3.5. pH值和抗原修复方法对核形态的影响
进一步实验表明，中性PBS（pH 7.0）处理的组织核形态保持完整，但抗原修复效率较低。微波法使用Tris-EDTA缓冲液对核的破坏程度低于高压法，说明修复方法的剧烈程度也会影响核结构的稳定性。
结论与讨论
本研究明确揭示了Tris-EDTA HIAR在甲状腺、肺和肾脏组织中会引起核结构破坏，进而影响核抗原的检测效果。这种破坏主要归因于其碱性环境（pH 9.0）和高温处理条件。然而，该缓冲液对非核抗原的检测仍具有优势。因此，在临床诊断和科研实践中，应根据检测目标（核抗原或非核抗原）和组织类型选择合适的抗原修复方案。该研究为优化IHC实验流程提供了重要参考，有助于提高病理诊断的准确性和科学研究的可靠性。
