《Scientific Reports》：Indirubin treatment was associated with modulation of the PI3K/AKT and MAPK pathways and induction of apoptosis and autophagy
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本研究针对宫颈癌治疗中化疗耐药性与副作用突出的临床难题，聚焦中药活性成分Indirubin的抗肿瘤机制。研究人员通过体内外实验证实，Indirubin可剂量依赖性地抑制HeLa细胞增殖并诱导凋亡，其作用与调控PI3K/AKT/mTOR通路（降低p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值）、激活自噬（升高LC3-II/LC3-I、降低P62）及抑制MEKK1/SEK1/JNK/AP-1通路密切相关。动物实验进一步显示Indirubin能安全抑制移植瘤生长并调节肿瘤微环境中Treg细胞比例。该研究为Indirubin作为宫颈癌靶向治疗候选药物提供了理论依据。
宫颈癌作为全球女性第二高发的恶性肿瘤，其发病与高危型人乳头瘤病毒（HPV）感染密切相关。尽管手术、放疗和化疗是当前主要治疗手段，但晚期患者疗效有限，且化疗药物易产生耐药性和严重毒副作用。近年来，传统中药在肿瘤辅助治疗中展现出独特优势，其中青黛的主要活性成分Indirubin已被证实具有抗肿瘤潜力，但其在宫颈癌中的具体作用机制尚不明确。
本研究发表于《Scientific Reports》，团队通过体外HeLa细胞实验和裸鼠U14宫颈癌移植瘤模型，系统探讨了Indirubin的抗肿瘤效应及分子机制。关键技术方法包括：CCK-8法检测细胞活力、流式细胞术分析凋亡率、实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法（Western Blot）检测通路关键基因与蛋白表达。动物实验采用BALB/c-Nude小鼠皮下接种U14细胞构建移植瘤模型，通过肿瘤体积与重量评估药效。
Indirubin抑制裸鼠宫颈癌生长并调节肿瘤微环境
体内实验显示，Indirubin（10、20、40 mg/kg）剂量依赖性地抑制移植瘤体积和重量，其中40 mg/kg组瘤重降至0.12 g（模型组0.8 g），且未引起小鼠体重显著变化。流式细胞术检测发现Indirubin治疗组CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞（Treg）比例升高，提示其可能通过免疫调节参与抗肿瘤作用。
Indirubin抑制HeLa细胞增殖并诱导凋亡
CCK-8实验表明Indirubin可时间-浓度依赖性降低HeLa细胞活力，80 μmol/L处理48小时后细胞存活率降至25.48%。凋亡检测进一步证实Indirubin（5–80 μmol/L）可显著增加早期和晚期凋亡细胞比例，80 μmol/L组凋亡率达65.49%，效果优于顺铂（DDP）和异环磷酰胺（IFO）。
Indirubin通过调控PI3K/AKT通路诱导自噬与凋亡
Western Blot结果显示，Indirubin处理后的HeLa细胞中自噬标志蛋白LC3-II/LC3-I比值升高，P62表达下降，同时磷酸化PI3K（p-PI3K）和AKT（p-AKT）水平降低，促凋亡蛋白BAX上调而抗凋亡蛋白BCL2下调。qPCR数据同步验证LC3、BAX基因表达上调，PI3K、AKT、BCL2基因表达抑制，表明Indirubin可通过抑制PI3K/AKT通路协同激活自噬与凋亡。
Indirubin抑制MEKK1/SEK1/JNK/AP-1信号通路激活
在移植瘤组织中，Indirubin剂量依赖性地降低MEKK1、SEK1、JNK1、AP-1的mRNA和磷酸化蛋白水平，提示其对MAPK信号通路的抑制作用可能协同贡献于抗肿瘤效应。
结论与讨论
本研究首次阐明Indirubin通过双重调控PI3K/AKT和MEKK1/SEK1/JNK/AP-1信号通路，诱导宫颈癌细胞自噬与凋亡，并调节肿瘤免疫微环境。值得注意的是，Indirubin在有效抑制肿瘤生长的同时未引起明显毒性反应，其多靶点作用特性为克服传统化疗耐药提供了新思路。未来需进一步开展时间梯度实验动态解析通路调控时序，并推进临床前安全性评价以验证其转化潜力。
