TMEM132A基因与疑似自身免疫性小脑性共济失调患者的自身免疫反应

《Journal of Neuroimmunology》：TMEM132A autoimmunity in patients with suspected autoimmune cerebellar ataxia

本研究通过免疫沉淀和质谱技术，发现新型自身抗体TMEM132A-IgG与小脑共济失调相关，并分析了436例患者的临床和影像学特征，为ACA诊断提供新依据。

　　

木村昭夫|武越明良|宫崎由里|大橋健太郎|鎌田幸子|田口有紀|杉原雅弘|渡边翼|上野雄二|柳口宏明|矢部一郎|深田有子|深田雅貴|下畑隆義

日本岐阜大学医学院神经学系

摘要

自身免疫性小脑性共济失调（ACA）是指由免疫机制引起的的小脑性共济失调。与ACA相关的自身抗体可以在患者体内检测到，并且是重要的生物标志物。在这项研究中，我们旨在识别ACA患者中的一种新的自身抗体。我们使用免疫组织化学和免疫细胞化学方法对小脑性共济失调患者的血清样本进行了自身抗体的筛查。通过免疫沉淀和质谱技术确定了这些自身抗体的目标抗原。我们发现，在小脑性共济失调患者的血清样本中，IgG与跨膜蛋白家族132A（TMEM132A）发生反应，而TMEM132A在中枢神经系统（CNS）中含量丰富。我们采用基于细胞的结合试验（CBA）对436名需要鉴别诊断ACA的小脑性共济失调患者、62名自身免疫性脑炎患者、27名以小脑性共济失调为主要表现的多系统萎缩患者、24名多发性硬化症患者、17名视神经脊髓炎谱系疾病患者、7名抗髓鞘少突胶质细胞糖蛋白抗体相关疾病患者以及14名健康受试者的血清样本进行了检测。我们在两名小脑性共济失调患者的血清样本中检测到了TMEM132A-IgG，其中一名患者是首次发现这种自身抗体的研究对象。其他参与者均未检测到这种抗体。这两名自身抗体阳性的患者表现出进行性小脑性共济失调，伴有锥体束病变和白蛋白细胞分离现象。脑部MRI检查显示，一名患者有小脑萎缩，另一名患者有双侧橄榄核高信号改变和假性肥大。TMEM132A-IgG可能是一种与自身免疫性CNS疾病（包括ACA）相关的新自身抗体。

引言

自身免疫性小脑性共济失调（ACA）是一种异质性疾病，其特征是因自身免疫机制导致的小脑功能障碍，可以是孤立的或以小脑功能障碍为主。ACA的诊断非常重要，因为大多数ACA患者对免疫治疗有反应。然而，由于缺乏明确的临床诊断标准，ACA的诊断有时较为困难。有时可以在ACA患者体内检测到特定的自身抗体，这些抗体的存在有助于确诊ACA。越来越多的研究描述了与ACA相关的自身抗体（Mu?iz-Castrillo等人，2022年）。我们推测，在ACA患者中可能还存在一些尚未被发现的自身抗体。

在这项研究中，我们在两名小脑性共济失调患者中发现了新的自身抗体。本文报告了这些携带新自身抗体的患者的临床特征和神经影像学检查结果。

研究设计与对象

2020年6月，我们发现了一名小脑性共济失调患者，其血清中的免疫球蛋白G（IgG）对大鼠脑组织中的神经元细胞以及培养的大鼠海马神经元的细胞表面抗原表现出特异性反应。随后，我们通过免疫沉淀和质谱技术确定跨膜蛋白家族132A（TMEM132A）是该患者IgG的目标抗原。用于免疫组织化学和免疫细胞化学的详细方法如下：

新自身抗原TMEM132A的鉴定

我们使用TBA方法对小脑性共济失调患者的血清样本进行了自身抗体的筛查。在一名患者（患者1）的血清中检测到了IgG，该IgG与小脑分子层的神经纤维以及颗粒层的颗粒细胞和细胞质发生强烈反应（图1A、C）。IgG还与海马颗粒神经元和锥体神经元发生反应（图1B）。我们通过培养的大鼠海马神经元的免疫荧光分析验证了这一结果。

讨论

本研究报道了两名携带TMEM132A-IgG的患者的临床特征、脑脊液（CSF）和神经影像学检查结果。这两名患者的特点如下：首先，患者表现为进行性小脑性共济失调和锥体束病变的征象；其次，脑脊液检查显示两名患者均存在白蛋白细胞分离现象，其中一名患者还检测到了寡克隆带；第三，一名患者的脑部MRI显示小脑萎缩，

研究资助

本研究得到了日本厚生劳动省“共济失调研究委员会”、“健康劳动科学研究补助金”以及“AMED”项目的资助，项目编号分别为：JP23ek0109532、JP24ek0109615和JP24ek0109680。

作者贡献

所有作者均参与了本研究的构思和设计。木村昭夫、武越明良、宫崎由里、大橋健太郎、鎌田幸子、田口有紀、杉原雅弘、渡边翼、上野雄二、柳口宏明、矢部一郎、深田有子、深田雅貴和下畑隆義负责样品制备、数据收集和分析工作。木村昭夫撰写了初稿，所有作者都对稿件的各个版本进行了审阅。所有作者均参与了研究的全过程。

CRediT作者贡献声明

木村昭夫：撰写初稿、项目管理、方法设计、研究实施、资金申请、数据分析、概念构建。武越明良：撰写与编辑、研究实施、数据分析、概念构建。宫崎由里：撰写与编辑、数据分析、概念构建。大橋健太郎：撰写与编辑、数据分析、概念构建。鎌田幸子：撰写与编辑

利益冲突声明

无。

致谢

我们感谢岐阜大学医学院神经学系的坂井绘里女士和小林麻由美女士提供的技术支持。同时感谢NIBB Trans-Omics Facility的牧野由美子女士提供的LC-MS/MS分析帮助。