山柰酚通过调控miRNA-367-3p/Fpn1轴抑制铁死亡并激活cAMP/CREB/CNTF通路缓解实验性自身免疫性脑脊髓炎

《Neurochemical Research》：Modulating miRNA-367-3p Expression by Kaempferol Alleviates Experimental Autoimmune Encephalomyelitis: Targeting Fpn1-Dependent Ferroptosis and cAMP/CREB/CNTF Signaling

本研究针对多发性硬化（MS）中铁死亡和髓鞘损伤的机制，探讨了天然黄酮类化合物山柰酚（KAM）的治疗潜力。通过构建MOG35-55诱导的EAE小鼠模型，研究发现KAM可通过上调miRNA-367-3p表达，促进铁转运蛋白Fpn1依赖的铁外排，恢复Slc7A11/GSH/GPX4轴功能，抑制神经元铁死亡；同时激活cAMP/CREB/CNTF信号通路，促进少突胶质细胞存活与髓鞘再生。结果表明，KAM能显著改善EAE小鼠神经功能缺损、减轻炎症浸润和氧化损伤，为MS提供了多靶点治疗新策略。

　　

多发性硬化（Multiple Sclerosis, MS）是一种以中枢神经系统脱髓鞘和轴突损伤为特征的自身免疫性疾病，目前尚无根治手段。近年来，铁死亡（ferroptosis）——一种铁依赖性的脂质过氧化驱动的新型细胞死亡方式——被发现在MS病变中扮演关键角色。脑内铁沉积、谷胱甘肽代谢紊乱和抗氧化酶GPX4活性下降，共同加剧少突胶质细胞死亡和髓鞘破坏。与此同时，神经营养因子信号通路如cAMP/CREB/CNTF的失调也影响髓鞘修复。因此，寻找能够同时靶向铁死亡和促进髓鞘再生的药物成为MS治疗的重要方向。

在这项发表于《Neurochemical Research》的研究中，作者团队首次系统评估了天然黄酮类化合物山柰酚（Kaempferol, KAM）在实验性自身免疫性脑脊髓炎（Experimental Autoimmune Encephalomyelitis, EAE）——MS的经典动物模型——中的神经保护作用及其分子机制。

研究人员采用雌性C57BL/6小鼠，通过髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽（MOG_35-55）免疫诱导EAE模型，并从免疫后第10天起每日腹腔注射KAM（50 mg/kg）持续6周。实验分为正常对照组、KAM单独处理组、EAE模型组和EAE+KAM治疗组。通过神经功能评分、组织病理学（H&E染色）、透射电镜观察超微结构、免疫组化检测髓鞘碱性蛋白（Myelin Basic Protein, MBP），以及分子生物学技术（包括qPCR、ELISA等）全面评估KAM对疾病表型、铁死亡相关指标、炎症因子和信号通路的影响。

主要技术方法概述

研究使用MOG_35-55肽段免疫雌性C57BL/6小鼠建立EAE模型；通过ELISA检测组织中Fe²⁺、MDA、GSH、SLC7A11、GPX4、IL-17、CCL-19、cAMP、p-CREB等指标；qPCR分析SLC40A1（Fpn1编码基因）、CNTF和miR-367-3p的表达；H&E染色和免疫组化（MBP）评估炎症浸润与髓鞘完整性；透射电镜观察轴突髓鞘超微结构。

KAM减轻EAE小鼠神经功能缺损

如表3所示，EAE模型组小鼠在免疫后第2周出现严重神经功能评分峰值（3.9±0.21），并在第6周出现复发（3.6±0.31）。而KAM治疗显著降低峰值评分（2.8±0.26），加速缓解，并在第6周基本抑制复发（0.65±0.24），说明KAM有效延缓了疾病进展（图1）。

KAM改善脑和脊髓组织病理学变化

H&E染色显示，EAE组大脑皮层和脊髓白质区出现大量炎症细胞浸润及髓鞘脱失（图2b–c、图3b–c），KAM治疗显著减少炎症细胞数量并恢复髓鞘结构（图2d–e、图3d–e）。透射电镜进一步证实KAM能修复髓鞘板的分离和线粒体嵴破坏（图4b–d、图5b–d）。

KAM抑制铁死亡与氧化损伤

EAE小鼠脑和脊髓组织中Fe²⁺和MDA水平显著升高，而SLC7A11、GSH、GPX4水平下降，表明铁死亡激活。KAM治疗逆转上述变化（图6–7），并上调铁输出蛋白Fpn1的编码基因SLC40A1表达（图6C），提示其通过促进铁外排和增强抗氧化防御抑制铁死亡。

KAM抑制神经炎症并激活cAMP/CREB/CNTF通路

EAE模型中促炎因子IL-17和趋化因子CCL-19显著升高，KAM有效降低其水平（图8）。同时，KAM提升cAMP和p-CREB蛋白含量，并上调CNTF基因表达（图9），表明其通过激活cAMP/CREB/CNTF轴促进髓鞘再生。免疫组化显示KAM治疗组MBP表达明显恢复（图11–12），证实髓鞘修复增强。

KAM上调miR-367-3p表达

miR-367-3p在EAE模型中表达下调，KAM治疗后其水平显著回升（图10）。该miRNA可能通过抑制EZH2（增强子zeste同源物2）间接促进SLC7A11转录，进而增强GPX4活性和抗铁死亡能力。

结论与意义

本研究首次揭示KAM通过多重机制缓解EAE：

1. 1.
   上调miR-367-3p，抑制Fpn1介导的铁超载，恢复Slc7A11/GSH/GPX4轴功能，抵抗神经元铁死亡；
2. 2.
   激活cAMP/CREB/CNTF通路，促进少突胶质细胞成熟与髓鞘再生；
3. 3.
   降低IL-17、CCL-19等炎症因子，减轻免疫细胞浸润。
   这些发现不仅阐明了KAM作为天然化合物的多靶点神经保护潜力，也为MS的病理机制提供了新的视角——铁死亡与神经营养信号交叉对话在疾病进展中的关键作用。此外，miR-367-3p被提出为潜在治疗靶点，为开发基于非编码RNA的MS干预策略奠定基础。