Anandamide与Oleamide通过线粒体复合物I抑制与PPAR-γ调控抑制胶质母细胞瘤增殖的机制研究

《Neurochemical Research》：The Anti-proliferative Effects of Anandamide and Oleamide in Glioblastoma Cell Lines Recruit Mitochondrial and PPAR-γ Receptor Modulation

本研究针对胶质母细胞瘤（GB）治疗中存在的血脑屏障穿透性差及耐药性等问题，探讨了内源性大麻素Anandamide（AEA）和Oleamide（ODA）通过调控线粒体功能与PPAR-γ受体抑制肿瘤增殖的新机制。结果表明，AEA和ODA可特异性降低GB细胞（C6和RG2）活力，通过抑制线粒体复合物I活性、诱导线粒体膜电位（ΔΨm）下降及脂质过氧化，且该过程与PPAR-γ受体调控相关。研究揭示了内源性大麻素靶向肿瘤代谢通路的潜力，为GB治疗提供了新策略。

　　

胶质母细胞瘤（Glioblastoma, GB）是中枢神经系统中最具侵袭性的恶性肿瘤，其标准治疗方案包括手术、放疗和替莫唑胺化疗，但疗效有限。由于血脑屏障（Blood-Brain Barrier, BBB）的阻碍作用及肿瘤的异质性和耐药性，患者预后极差，中位生存期仅约15个月。近年来，靶向肿瘤代谢重编程成为GB治疗的新方向。线粒体作为细胞能量代谢和氧化应激调控的核心细胞器，在GB进展中扮演双重角色：既支持肿瘤细胞快速增殖所需的生物合成前体，又可能通过过度产生活性氧（Reactive Oxygen Species, ROS）诱导细胞死亡。此外，过氧化物酶体增殖物激活受体γ（Peroxisome Proliferator-Activated Receptor Gamma, PPAR-γ）作为调控线粒体生物发生的关键转录因子，其激动剂在部分研究中显示出抗GB活性，但具体机制尚不明确。

内源性大麻素（endocannabinoids, eCBs）如Anandamide（AEA）及其衍生物Oleamide（ODA）已知通过大麻素受体CB₁/CB₂发挥抗肿瘤作用，但近年来研究发现它们亦可激活PPAR-γ等非经典受体。然而，eCBs是否通过调控线粒体功能及PPAR-γ信号抑制GB增殖，仍是未解之谜。为此，墨西哥国立自治大学等机构的研究团队在《Neurochemical Research》发表论文，系统探讨了AEA和ODA在GB细胞系C6和RG2中通过线粒体与PPAR-γ通路介导的抗增殖机制。

关键实验方法概述

研究采用GB细胞系C6与RG2及原代星形胶质细胞（非肿瘤对照），通过MTT法检测细胞活力，硫代巴比妥酸法（TBA）评估脂质过氧化水平，JC-1荧光探针测定线粒体膜电位（ΔΨm），并分析线粒体复合物I（NADH:泛醌氧化还原酶）活性。使用PPAR-γ拮抗剂GW9662预处理，以验证该受体在eCBs效应中的作用。数据经GraphPad Prism 9软件进行统计学分析。

研究结果

1. AEA与ODA选择性抑制GB细胞活力

MTT实验显示，25 μM和50 μM的AEA与ODA处理24小时后，C6和RG2细胞活力均呈浓度依赖性下降（最大抑制率分别为45–65%），而对原代星形胶质细胞无显著毒性，表明eCBs的抗增殖作用具有肿瘤特异性。

2. eCBs通过脂质过氧化加剧氧化损伤

在C6和RG2细胞中，AEA（5–25 μM）和ODA（50–100 μM）均显著升高脂质过氧化产物丙二醛（Malondialdehyde, MDA）水平，增幅达50–100%，提示氧化应激参与其抗肿瘤机制。

3. PPAR-γ拮抗剂在不同GB细胞系中呈现差异化调控

PPAR-γ抑制剂GW9662预处理后，C6细胞对AEA/ODA的敏感性无显著变化，而RG2细胞中GW9662反而增强eCBs的细胞毒性（抑制率提升至60%），表明PPAR-γ在RG2细胞中可能起保护性作用，其抑制加剧代谢紊乱。

4. 线粒体膜电位与复合物I活性受损是抗增殖关键环节

JC-1检测发现，AEA和ODA可显著降低C6细胞的ΔΨm（降幅30–50%），但仅ODA对RG2细胞有轻微影响。线粒体复合物I活性分析显示，AEA和ODA在C6细胞中均抑制该酶活性（降幅30–50%），而在RG2细胞中仅ODA有效。这些差异与两细胞系的代谢特性相关：C6细胞更依赖氧化磷酸化（OXPHOS），而RG2细胞偏向糖酵解。

5. PPAR-γ调控参与线粒体功能紊乱

GW9662可部分逆转AEA引起的C6细胞ΔΨm下降，提示AEA部分通过PPAR-γ调控线粒体功能。相反，在RG2细胞中，GW9662单独处理即引发ΔΨm显著降低，进一步印证PPAR-γ在该细胞系中对线粒体稳态的维护作用。

结论与意义

本研究首次揭示AEA和ODA通过抑制线粒体复合物I活性、诱导线粒体膜电位崩溃及氧化损伤，进而抑制GB增殖，且该过程受PPAR-γ受体差异化调控。C6与RG2细胞系对eCBs的响应差异反映了GB肿瘤异质性在代谢靶向治疗中的重要性。该研究不仅深化了对内源性大麻素抗肿瘤机制的理解，还为开发基于代谢重编程的GB治疗策略提供了实验依据，尤其强调针对特定肿瘤代谢表型个性化用药的潜力。