《Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation》：Interleukin-9 Regulates NF-kB-Mediated Activation of Astrocytes in Multiple Sclerosis Brain
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本研究发现，在多发性硬化症（MS）患者脑组织中，星形胶质细胞高表达白细胞介素-9受体（IL-9R）。研究通过体外实验证实，IL-9能够抑制白细胞介素-1β（IL-1β）诱导的核因子κB（NF-κB）通路活化，包括降低IKKα/β和p65磷酸化、抑制p65核转位，并下调粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF/CSF2）等促炎基因的表达。该研究揭示了IL-9在MS中通过调节星形胶质细胞-小胶质细胞轴发挥抗炎作用的新机制，为神经炎症疾病的治疗提供了新靶点。
星形胶质细胞在多发性硬化症进展期患者额叶皮质中表达IL-9R
研究首先通过蛋白质印迹分析发现，多发性硬化症（MS）患者额叶皮质组织中IL-9受体（IL-9R）的表达水平显著高于非神经系统疾病死亡的对照组个体。免疫组织化学染色进一步证实，MS患者脑组织白质（WM）和灰质（GM）中均存在IL-9R阳性细胞，这些细胞呈现典型的星形胶质细胞星状形态。免疫荧光双标染色显示，IL-9R信号与星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白（GFAP）共定位，表明星形胶质细胞是MS脑内IL-9R的主要表达细胞类型。定量分析表明，MS患者脑内IL-9R的平均荧光强度，尤其是在白质区域，显著高于对照组。
IL-9影响IL-1β诱导的人促炎星形胶质细胞中NF-κB的活化
为探究IL-9对活化星形胶质细胞的作用，研究使用了三种人源星形胶质细胞模型：人星形胶质瘤细胞系（U-373 MG）、原代正常人星形胶质细胞（NHA）和诱导多能干细胞来源的星形胶质细胞（iAstrocytes）。用IL-1β刺激细胞以诱导其向促炎表型转化。蛋白质印迹结果显示，IL-1β可时间依赖性地激活NF-κB通路，表现为IKKα/β和RelA/p65（Ser536位点）的磷酸化水平升高。而IL-9的共处理能显著抑制IL-1β诱导的IKKα/β和p65磷酸化。此外，免疫荧光实验证实，IL-1β能诱导NF-κB p65亚基的核转位，而IL-9处理可显著降低p65阳性细胞核的比例，这一抑制效应在三种星形胶质细胞模型中均得到验证。
IL-9下调人促炎星形胶质细胞中CSF2、MAP3K7和MAP3K14的转录
通过转录组学分析IL-1β刺激后NF-κB通路相关基因的表达谱，发现IL-1β可上调15个基因的表达，其中包括多个促炎因子和信号分子基因。IL-9处理能特异性逆转其中三个基因的IL-1β诱导性上调：CSF2（编码GM-CSF）、MAP3K7（编码TAK1）和MAP3K14（编码NIK）。TAK1和NIK分别是NF-κB经典和非经典通路的上游激酶，它们的下调表明IL-9可能从上游抑制NF-κB通路的持续活化。
IL-9通过调控CSF2转录来调节促炎星形胶质细胞的GM-CSF产生
研究进一步聚焦于GM-CSF（CSF2基因产物）。染色质免疫沉淀（ChIP）实验显示，IL-1β刺激能显著增强NF-κB p65亚基与CSF2基因增强子和启动子区域的结合，而IL-9共处理则能显著削弱这种结合。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和酶联免疫吸附试验（ELISA）结果一致表明，IL-9能降低IL-1β诱导的CSF2 mRNA转录水平和GM-CSF蛋白的分泌量。流式细胞术细胞内染色也证实IL-9减少了产生GM-CSF的星形胶质细胞比例。这些结果说明IL-9通过抑制NF-κB对CSF2基因的转录激活，进而减少GM-CSF的产生。
讨论
本研究首次证实IL-9能通过抑制NF-κB通路来调节人星形胶质细胞的炎症活性。在MS的神经炎症环境中，星形胶质细胞高表达IL-9R，IL-9通过抑制IKKα/β和p65的磷酸化、p65核转位，以及下调TAK1（MAP3K7）、NIK（MAP3K14）和GM-CSF（CSF2）等关键促炎介质的表达，促使星形胶质细胞从促炎状态向抗炎状态转变。GM-CSF是激活小胶质细胞的关键因子，因此IL-9对星形胶质细胞GM-CSF产生的抑制，可能间接调节星形胶质细胞-小胶质细胞轴，从而在MS中发挥神经保护作用。IL-9R在MS脑内的上调可能是一种代偿性的抗炎机制。这些发现不仅深化了对MS发病机制的理解，也为将IL-9及相关通路作为神经炎症性疾病（如阿尔茨海默病、帕金森病等）的治疗靶点提供了新的理论依据。
