Nexavant佐剂鼻内疫苗通过诱导黏膜与全身免疫在小鼠模型中展现强大保护效力

《Frontiers in Immunology》：Intranasal vaccines adjuvanted with Nexavant demonstrate robust protective efficacy by inducing both mucosal and systemic immunity in a murine model

本研究发现新型TLR3激动剂Nexavant（NVT）作为鼻内疫苗佐剂，可同时激活TLR3/RIG-I通路，通过I型干扰素（IFN-I）依赖性机制诱导系统性IgG（免疫球蛋白G）和黏膜IgA（免疫球蛋白A）应答。在流感病毒和脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗（MCV）模型中，NVT佐剂疫苗均能产生广泛黏膜免疫交叉保护，为规避病毒载体疫苗安全性风险提供了新型佐剂平台。

　　

1 引言

黏膜作为病原体入侵的首要屏障，其免疫诱导对呼吸道感染防控具有关键意义。当前鼻内疫苗多采用病毒载体平台，存在神经炎症风险且免疫原性不足。亚单位疫苗虽安全性良好，但需佐剂增强黏膜免疫。Nexavant（NVT）作为精确定义的TLR3（Toll样受体3）激动剂，可同时激活TLR3和RIG-I（维甲酸诱导基因I）通路，规避传统poly(I:C)（聚肌胞苷酸）的异质性和MDA5（黑色素瘤分化相关基因5）介导的过度免疫反应，在肺部接种模型中已证实可诱导驻留记忆CD4⁺T细胞。

2 材料与方法

研究采用C57BL/6小鼠及IFNAR1^-/-（I型干扰素受体1缺陷）模型，以商业流感裂解疫苗（H1N1）和脑膜炎球菌C型多糖-CRM197（白喉毒素突变体）结合疫苗（MCV）为抗原，对比肌肉注射（i.m.）与鼻内接种（i.n.）途径。通过ELISA（酶联免疫吸附试验）、流式细胞术、血凝抑制（HAI）和血清杀菌（SBA）实验评估免疫应答，并采用100 LD₅₀（半数致死剂量）和5000 LD₅₀流感病毒攻毒验证保护效果。

3 结果

3.1 NVT鼻内激活先天免疫依赖I型干扰素

鼻内给予NVT 5小时后，鼻相关淋巴组织（NALT）中TLR3、RIG-I、MDA5及IFN-β（干扰素β）mRNA（信使核糖核酸）表达显著上调（图1A-D）。24小时后NALT中巨噬细胞（CD11b⁺F4/80⁺）、中性粒细胞（CD11b⁺Ly6G⁺）和树突状细胞（MHC-II⁺CD11c⁺）数量增加，且树突状细胞共刺激分子CD40/CD80/CD86表达升高（图1E-K），该效应在IFNAR1^-/-小鼠中完全消失。

3.2 NVT佐剂鼻内疫苗展现协同免疫保护

H1N1+NVT鼻内免疫组同时诱导血清IgG（系统性免疫）和鼻洗液IgA（黏膜免疫），脾脏抗原特异性CD4⁺T细胞（IFN-γ⁺CD44⁺）应答增强（图2B-D），NALT中亦检测到CD4⁺T细胞活化（图2G）。攻毒实验显示，鼻内免疫组在5000 LD₅₀高剂量攻毒下存活率100%，且体重损失显著低于肌肉注射组（图2J-K）。值得注意的是，鼻内免疫还触发远端黏膜（唾液、阴道洗液、粪便）抗原特异性IgA分泌（图2L-N），表明黏膜免疫交叉对话。

3.3 免疫应答依赖I型干扰素通路

IFNAR1^-/-小鼠鼻内接种H1N1+NVT后，系统性IgG、黏膜IgA及T细胞应答均未诱导（图3B-F），且全部死于100 LD₅₀攻毒（图3G），证实I型干扰素信号通路为NVT佐剂功能核心。

3.4 NVT拓展至多糖蛋白结合疫苗平台

脑膜炎球菌MCV疫苗鼻内接种时，仅NVT佐剂组可同时诱导血清杀菌抗体（SBA）和鼻洗液多糖特异性IgA（图4B-D），证明NVT可克服多糖抗原黏膜免疫原性弱的瓶颈。

4 讨论

本研究首次证实NVT佐剂鼻内疫苗可通过I型干扰素通路协调黏膜-全身免疫应答，且适用于蛋白和多糖抗原平台。严格控制接种体积（<10μl）可精准靶向上呼吸道，避免肺内递送导致的系统性免疫 bias（偏差）。远端黏膜IgA分泌提示潜在用于性传播或肠道黏膜疫苗开发。后续需在大型动物中验证其转化价值。