《Frontiers in Immunology》：Combined therapy with the estrogen receptor ERα and IFNα-2b suppresses HBV replication by inducing GBP1 expression
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本研究发现雌激素受体（ERα）与聚乙二醇干扰素α-2b（peg IFNα-2b）联合治疗可通过上调鸟苷酸结合蛋白1（GBP1）的表达，显著抑制乙型肝炎病毒（HBV）的转录与复制。研究通过RNA测序（RNA-seq）、分子对接及动力学模拟证实ERα与GBP1直接相互作用，且其结合关键区域为ERα的EF结构域（配体结合域）。临床样本分析显示，CHB患者外周血单核细胞（PBMCs）及肝组织中GBP1与ERα表达呈正相关，且GBP1富集于NOD样信号通路，提示其通过激活先天免疫增强干扰素疗效。该研究为慢性乙型肝炎（CHB）的性别差异化治疗及联合用药策略提供了新靶点。
引言
乙型肝炎病毒（HBV）是一种嗜肝DNA病毒，通过结合钠离子-牛磺胆酸共转运多肽（NTCP）受体特异性感染肝细胞，可进展为急性或慢性肝炎，显著增加肝硬化及原发性肝癌（HCC）的患病风险。全球虽有安全有效的HBV疫苗，但仍有2.4亿人发展为慢性乙型肝炎（CHB），对公共卫生构成严重威胁。目前临床治疗CHB的一线药物包括核苷（酸）类似物（NAs）和干扰素-α（IFN-α），其中聚乙二醇干扰素α-2b（peg IFNα-2b）能有效降低乙型肝炎表面抗原（HBsAg）水平、提高临床治愈率并降低HCC发生率。值得注意的是，女性对干扰素治疗的早期应答率显著优于男性，既往研究证实雌激素受体ERα可抑制HBV转录，但其与peg IFNα-2b的联合作用机制尚不明确。
材料与方法
研究纳入66例接受peg IFNα-2b治疗的成人CHB患者（男性40例，女性26例）及17例健康对照，采集外周血及肝组织样本。通过体外细胞模型（HepG2-NTCP、Huh7-HBV1.3等）过表达ERα或GBP1，并联合peg IFNα-2b干预，利用RNA-seq筛选差异表达基因（DEGs），采用共免疫沉淀（Co-IP）、分子动力学模拟及免疫荧光等技术分析ERα与GBP1的相互作用及亚定位。临床样本中GBP1与ERα的RNA及蛋白水平通过qRT-PCR、ELISA和免疫组化检测。
结果
- 1.
ERα与peg IFNα-2b协同抑制HBV复制
Northern blot结果显示，单独过表达ERα或使用peg IFNα-2b均可降低HBV RNA水平，而联合干预进一步强化了这一抑制效果（图1A）。RNA-seq分析发现ERα过表达组与IFNα-2b刺激组存在53个交集基因，其中GBP1为表达上调最显著的基因（图1B-E）。qRT-PCR及Western blot验证显示，联合处理可显著提升GBP1表达，同时降低乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎e抗原（HBeAg）及HBV核心蛋白（HBc）水平（图1F-G）。
- 2.
ERα与GBP1直接相互作用
Co-IP实验证实ERα与GBP1存在物理结合（图2）。分子动力学模拟表明二者结合稳定，结合能较低，作用位点集中于ERα的EF区域（配体结合域），该区域参与受体二聚化及核定位（图6A-H）。缺失EF区域的ERα突变体（ERα-ΔEF）显著削弱其对GBP1的诱导能力及抗HBV效果（图7）。
- 3.
GBP1介导联合治疗的抗病毒效应
在Huh7-HBV1.3细胞中，过表达GBP1可协同peg IFNα-2b进一步抑制HBV RNA（总RNA及3.5 kb RNA）及病毒蛋白表达（图3A-F）；反之，沉默GBP1则部分逆转干扰素的抗病毒作用（图4-5）。免疫荧光显示ERα主要定位于细胞核，而GBP1在胞质表达丰富；过表达ERα可促进GBP1向核内转移，该效应依赖于其EF区域（图8）。
- 4.
临床样本验证GBP1的预测价值
CHB患者血清及PBMCs中GBP1水平显著高于健康对照，且治疗应答组GBP1与ERα表达均高于非应答组（图9A-F）。Spearman相关性分析显示ERα与GBP1表达呈正相关（r=0.87, P<0.0001）。ROC曲线提示治疗6个月后GBP1与ERα水平对早期应答预测价值最高（AUC=0.862）（图9H）。免疫组化证实应答者肝组织中ERα与GBP1表达更高（图9I）。KEGG富集分析显示GBP1参与NOD样信号通路激活，可能通过调节炎症小体及免疫应答增强干扰素疗效（图10）。
讨论
本研究首次揭示ERα与peg IFNα-2b通过协同诱导GBP1表达抑制HBV复制的分子机制。ERα与GBP1的直接结合及其EF区域的关键作用，阐明了性别差异影响干扰素疗效的潜在基础。临床数据进一步支持GBP1作为预测干扰素应答的生物标志物。该发现为开发针对ERα-GBP1轴的联合疗法提供了理论依据，尤其为男性或干扰素低应答CHB患者的精准治疗开辟新途径。未来需扩大样本验证GBP1动态表达谱，并深入探索其与HBV蛋白互作网络在免疫调控中的具体机制。
