《Archives of Virology》：New parajeilongviruses detected in bats but not in humans: assays for screening and diagnostic purposes
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本研究针对高致病性人畜共患副黏病毒筛查工具匮乏的现状，建立了可筛查人及蝙蝠样本的巢式泛PCR方法与可特异性鉴别尼帕病毒及亨德拉病毒G1/G2基因型的实时RT-qPCR技术。研究在芬兰及肯尼亚558例疑似中枢神经系统感染患者样本中未检出副黏病毒，但在肯尼亚340份蝙蝠粪便中首次于安哥拉自由尾蝠体内发现两种新型副杰隆病毒。该研究为副黏病毒病原监测及高危病毒快速诊断提供了关键技术支撑，对提升新发人畜共患病防控能力具有重要意义。
在全球化进程加速和人类与野生动物接触日益频繁的背景下，新发再发传染病对公共卫生安全构成严峻挑战。研究表明，超过60%的新发传染病源于动物，其中近72%的病原体来自野生动物。副黏病毒科病毒因其高变异率和跨种传播能力，被视为潜在的高风险病原体。亨德拉病毒和尼帕病毒等蝙蝠源病毒的暴发，不仅造成严重人类感染病例，更揭示出这类病毒在蝙蝠种群中的广泛分布及其通过中间宿主传播的风险。尽管非洲地区已有亨尼帕样病毒的血清学证据，但针对当地蝙蝠种群携带副黏病毒的系统性筛查及高效诊断工具的研发仍存在空白，特别是对于芬兰等尚无本地人畜共患副黏病毒感染报告的地区，建立前瞻性监测体系显得尤为迫切。
为提升对现有及新型人畜共患病毒的防范能力，研究团队致力于开发高效的筛查与诊断方法。本研究建立了巢式泛PCR技术用于广泛筛查副黏病毒，并研发了特异性实时RT-qPCR方法用于尼帕病毒和亨德拉病毒（包括G1和G2基因型）的快速鉴别诊断。研究共收集679份人类样本（包括芬兰558名患者的619份样本和肯尼亚60名发热患者的血清样本），以及340份2021-2023年间在肯尼亚采集的蝙蝠粪便样本。所有人类样本经巢式泛PCR检测均为副黏病毒阴性。在蝙蝠样本中，从132只安哥拉自由尾蝠中检出2例副杰隆病毒阳性，系统进化分析显示该病毒与坦桑尼亚发现的蝙蝠源副杰隆病毒高度同源（序列相似性达98-99%）。实时RT-qPCR方法展示出良好的特异性和灵敏度，对尼帕病毒、亨德拉病毒G1和G2的检测限分别为9.8、14.1和7.2拷贝/反应。
主要技术方法
研究采用巢式泛PCR技术，使用已知引物扩增副黏病毒保守基因区域，并通过Sanger测序进行验证。为规避巢式PCR易污染的问题，设计了带有人工标识的质粒对照。同时建立了特异性实时RT-qPCR方法，针对尼帕病毒和亨德拉病毒（含G1/G2型）核衣壳蛋白基因设计引物探针，并进行灵敏度、特异性和重复性验证。人类样本RNA通过半自动化核酸提取系统获取，蝙蝠粪便样本RNA采用TRIzol法提取。
Nested pan-PCR testing of human samples
对619份芬兰患者样本（606份血清、13份脑脊液）和60份肯尼亚患者血清进行巢式泛PCR筛查，虽在部分样本中扩增出非特异性条带，但经测序验证均为人类DNA，未检测到副黏病毒核酸。
Nested pan-PCR testing of bat samples
在340份蝙蝠粪便样本中，从2只成年雄性安哥拉自由尾蝠中检出副杰隆病毒序列。系统进化分析表明该序列与非洲蝙蝠源副杰隆病毒聚类，支持该类病毒在非洲大湖地区蝙蝠种群中的循环。
Henipavirus RT-qPCR assays
新建立的实时RT-qPCR方法能够特异性鉴别尼帕病毒和亨德拉病毒（G1/G2），对20种非目标病毒RNA和54份临床样本检测均为阴性，灵敏度与重复性符合诊断要求。
本研究成功建立了副黏病毒筛查和特异性诊断的技术平台。巢式泛PCR技术适用于大规模样本的初步筛查，而实时RT-qPCR方法则为高危病毒的快速应急诊断提供了可靠工具。在肯尼亚蝙蝠中新发现的副杰隆病毒，丰富了我们对副黏病毒多样性的认识，提示蝙蝠作为该类病毒自然宿主的潜在风险。尽管在现有人类样本中未发现副黏病毒感染证据，但全球旅行和生态变化背景下，持续监测野生动物病毒组、完善快速诊断体系，对防范新发传染病跨境传播具有重要战略意义。研究成果为副黏病毒病原学研究提供了关键技术支撑，也为相关地区的传染病防控预警提供了科学依据。
