《Journal of Investigative Dermatology》：Lenabasum, a cannabinoid type 2 receptor agonist, exerts anti-inflammatory effects in Dermatomyositis
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本研究探讨非免疫抑制性CB2受体激动剂Lenabasum在皮肤型皮肌炎中的抗炎机制。通过流式细胞术分析皮肤和PBMCs，发现Lenabasum显著抑制CD4+ T细胞、Th1细胞及单核细胞衍生的树突状细胞分泌IL31、IFNγ等炎症因子，其效果在皮肤细胞中更显著。机制研究表明，CB2受体介导的抑制效应受局部微环境影响，解释了药物在皮肤与肌肉中的不同疗效。
德安娜·迪亚兹（DeAnna Diaz）| 托马斯·瓦兹克斯（Thomas Vazquez）| 尼莱什·科达利（Nilesh Kodali）| 穆罕默德·M·巴希尔（Muhammad M. Bashir）| 麦迪逊·格林内尔（Madison Grinnell）| 罗汉·迪曼（Rohan Dhiman）| 艾米丽·凯斯（Emily Keyes）| 乔舒亚·丹（Joshua Dan）| 朱莉安·克莱奇（Julianne Kleitsch）| 卡罗琳·J·斯通（Caroline J. Stone）| 维多利亚·P·沃斯（Victoria P. Werth）
迈克尔·J·克雷森茨下士（Corporal Michael J. Crescenz），宾夕法尼亚州费城VAMC
摘要
皮肌炎（Dermatomyositis, DM）是一种自身免疫性疾病，典型地影响皮肤、肌肉和肺部。DM患者的生活质量较差，目前的治疗方法对一半的DM患者无效。因此，需要一种更有效且更安全的治疗选择。Lenabasum是一种非免疫抑制性的、非精神活性的CB2（大麻素受体2型）激动剂，能够促进先天免疫反应的消退。CB2的激活可以减少与DM相关的多种促炎细胞因子。本研究的目的是对DM患者的皮肤和PBMCs（外周血单核细胞）进行多重分析，以研究Lenabasum对促炎和瘙痒相关细胞因子的影响。我们的数据显示，Lenabasum具有抗炎作用，尤其是对CD4+ T细胞、Th1细胞以及单核细胞衍生的树突状细胞（moDCs）等髓系细胞谱系。Lenabasum能够抑制Th1细胞产生的IL31和moDCs产生的IL31，这两种细胞因子与DM引起的瘙痒有关。从DM患者皮肤中提取的细胞中敲低CB2表达后，这些抗炎作用消失。从DM皮肤中提取的细胞比从DM PBMCs中提取的细胞表现出更高的CB2表达和更强的Lenabasum反应，这表明局部组织环境会影响炎症细胞的行为。我们的结果表明，Lenabasum通过CB2途径起作用，促进促炎细胞因子的下调。这可能解释了在人体研究中Lenabasum对皮肤的作用比对肌肉更显著的原因。
章节摘录
引言
皮肌炎（DM）是一种自身免疫性结缔组织疾病，典型表现为特征性的皮肤病变和近端炎症性肌病（即经典型皮肌炎）。患者也可能表现为以皮肤症状为主的形式（即临床上的无肌病型DM）。先前的研究表明，DM患者的生活质量较差，疾病活动性和瘙痒（pruritus）是他们不适的主要因素。（Goreshi等人，2011年）
Lenabasum可降低来自moDCs、CD4+细胞和Th1细胞的IFNγ、IFNβ、IL31和IL4的分泌。
我们利用流式细胞术分析了从DM皮肤和PBMCs中提取的11种细胞群体，以研究Lenabasum对炎症细胞因子IFNγ、IFNβ、IL31和IL4的影响。当用15μM的Lenabasum处理PBMCs时，我们未观察到这些细胞因子水平的显著下降（图1、图2和补充图S1、S2）。然而，在比较从DM皮肤中提取的所有细胞谱系时，发现炎症细胞因子IFNγ、IFNβ、IL31和IL4的水平显著下降。
使用多重流式细胞术发现，在用成纤维细胞上清液培养的DM患者PBMCs中，CB2、IFNγ、IFNβ、IL31和IL4的水平升高。
最后，我们试图研究成纤维细胞在CB2激活中的作用。我们假设皮肤中的成纤维细胞可能在上调炎症细胞上的CB2表达中起重要作用。我们将PBMCs与成纤维细胞及成纤维细胞上清液共同培养，并使用流式细胞术评估了十一种细胞谱系的变化。同时，在相同的成纤维细胞培养基中培养了未暴露于成纤维细胞的PBMCs对照组，也观察到了显著的变化。
讨论
多年来，人们一直在研究内源性大麻素系统的治疗益处，特别是CB2激动剂在炎症性疾病中的抗炎作用。（Kogan和Mechoulam，2007年；Krustev等人，2014年；Wen等人，2015年）CB2激动剂能够抑制白细胞增殖和细胞因子的释放。（Cencioni等人，2010年）无论是体外还是体内研究都表明，CB2具有抑制免疫反应的能力，这提示选择性CB2激动剂可能具有潜在的治疗价值。
实验模型和研究参与者详情
本研究遵循《赫尔辛基宣言》进行。参与者来自宾夕法尼亚大学医院的DM数据库，对照组来自该校皮肤科，招募过程符合经批准的机构审查委员会协议（协议编号#808230）。安全结果发布在
clinicaltrials.gov（NCT02466243）。所有成年参与者均签署了书面知情同意书。共有39名参与者参与了本研究。
皮肤细胞的分离
活检组织被切碎后，在0.08%的胰蛋白酶中消化过夜，次日再在含有0.125 mg/mL Liberase TL（Sigma-Aldrich）的DMEM培养基中于37°C下消化2小时。随后将样本通过70毫米细胞过滤器过滤，并用培养基清洗。过滤后的PBMCs进行计数，选择细胞浓度为1 × 106个/mL的样本进行培养和染色。
伦理声明
所有涉及人类参与者的程序均符合机构研究标准和《赫尔辛基宣言》的原则。皮肤和血液样本的收集遵循宾夕法尼亚大学机构审查委员会（IRB #808230）批准的方案。所有参与者均签署了书面知情同意书。参与者的种族和民族信息由他们自行报告，并录入REDCap数据库。
数据可用性声明
Lenabasum是一种正在研发中的试验药物。个体去标识化的参与者数据和数据字典可向主要研究者VPW及赞助商Corbus Pharmaceuticals索取。安全结果发布在clinicaltrials.gov（NCT02466243）。其余研究文件，如研究方案、统计分析计划和书面知情同意书，仅向学术研究者提供，如需获取请提出申请。利益冲突
Corbus公司共同资助了II期试验，并赞助了III期临床试验。其他作者均声明无利益冲突。作者贡献
概念设计：V.P.W.、D.D.；方法学：V.P.W.、D.D.、T.V.、N.K.、R.D.、M.B.；数据管理：D.D.、T.V.、N.K.、R.D.、M.B.、M.G.、E.K.、J.D.、J.K.、C.J.S.；数据分析：D.D.、V.P.W.、T.V.、N.K.；调查：D.D.、T.V.、N.K.、R.D.、M.B.、M.G.、E.K.、J.D.、J.K.、C.J.S.；初稿撰写：D.D.、T.V.；审稿与编辑：D.D.、V.P.W.、T.V.、M.G.、E.K.、R.D.、N.K.、J.D.、J.K.、C.J.S.；监督：V.P.W.；资金筹集：V.P.W.致谢
本研究得到了NIH R01 AAR076766、NIH多样性补充资金（R01AR076766 - 03W1）、ECuRE奖学金以及退伍军人事务部退伍军人健康管理局研究与发展办公室的生物医学实验室研究（BX005921）的支持。此外，该研究还得到了宾夕法尼亚大学皮肤生物学与疾病资源中心（Penn Skin Biology and Diseases Resource-based Center）核心A项目的资助，该项目由1P30AR069589 - 01（Millar）资助。
