《Clinical and Translational Medicine》：Targeting the lactylation of ENO1 alleviates endothelial dysfunction in sepsis
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本研究揭示了脓毒症中乳酸通过P300介导的ENO1 K71位点乳酸化，减弱ENO1与TRIM21 mRNA结合，增强其稳定性，进而促进VE-Cadherin泛素化降解导致内皮屏障破坏的分子通路。靶向抑制ENO1-K71乳酸化的特异性多肽可显著改善脓毒症小鼠内皮功能与生存率，为脓毒症治疗提供了新靶点。
研究背景
脓毒症作为一种危及生命的器官功能障碍综合征，其病理特征中血管内皮功能障碍导致的微血管渗漏和组织水肿尤为关键。临床数据显示脓毒症患者血清乳酸水平与炎症严重程度呈正相关，而乳酸除作为代谢标志物外，更通过新型翻译后修饰——乳酸化，参与细胞功能调控。烯醇化酶1（ENO1）作为糖酵解关键酶兼RNA结合蛋白，其在脓毒症中的乳酸化修饰及其功能影响尚未明确。
乳酸诱导的内皮乳酸化与屏障功能障碍
通过盲肠结扎穿刺（CLP）构建脓毒症小鼠模型，发现血清乳酸水平随疾病进展显著升高，伴随微血管通透性增加和血管VE-Cadherin表达降低。体外实验表明，脂多糖（LPS）与乳酸联合刺激可协同增强人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的乳酸化水平，并加剧VE-Cadherin降解、细胞通透性增加和迁移能力受损。使用乳酸脱氢酶A（LDHA）抑制剂干预后，小鼠血清乳酸水平下降，血管乳酸化减弱，VE-Cadherin表达恢复，内皮屏障功能改善。
ENO1 K71位点作为内皮细胞乳酸化关键靶点
液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）筛选鉴定出ENO1为内皮细胞中显著乳酸化的非组蛋白。免疫共沉淀证实乳酸可诱导ENO1乳酸化增强，且该修饰主要发生于K71位点。序列比对与结构分析显示K71位点在不同物种中高度保守。突变K71位点（K71R）可显著抑制ENO1乳酸化，但不影响其酶活性。内皮细胞特异性敲低ENO1可导致小鼠微血管通透性增加。
P300作为ENO1-K71乳酸化的乳酸转移酶
筛选发现组蛋白乙酰转移酶P300可显著促进ENO1乳酸化。LPS与乳酸刺激上调P300表达，且P300与ENO1存在直接相互作用。抑制P300活性可降低ENO1乳酸化水平，恢复VE-Cadherin表达并改善内皮功能。在脓毒症小鼠模型中，P300抑制剂干预可降低血管乳酸化、减轻器官损伤并提高生存率。
TRIM21作为VE-Cadherin的E3泛素连接酶
RNA测序显示乳酸化调控涉及泛素化通路。进一步实验证实TRIM21可直接结合VE-Cadherin并通过其PRY-SPRY结构域介导K48连锁泛素化修饰，促进VE-Cadherin蛋白酶体降解。在TRIM21基因敲除（KO）小鼠中，LPS诱导的脓毒症所致血管损伤显著减轻。
ENO1-K71乳酸化通过破坏RNA降解复合体增强TRIM21 mRNA稳定性
机制研究表明，ENO1作为RNA结合蛋白可招募去腺苷酸化酶CNOT6至TRIM21 mRNA的3′非翻译区（3′ UTR），促进其降解。乳酸化修饰削弱了ENO1与TRIM21 mRNA的结合能力，同时减少CNOT6招募，从而增强TRIM21 mRNA稳定性与蛋白表达。ENO1-K71R突变体则能维持与CNOT6的相互作用，促进TRIM21 mRNA降解。
靶向抑制ENO1-K71乳酸化改善脓毒症预后
基于K71位点序列设计细胞穿透肽（Peptide-K71），可竞争性抑制ENO1乳酸化。该多肽处理能降低TRIM21表达、减少VE-Cadherin泛素化，并改善内皮细胞屏障功能。在脓毒症小鼠模型中，Peptide-K71干预显著降低微血管通透性和多器官损伤指标，提高生存率，且该保护作用依赖于TRIM21表达。
讨论与展望
本研究首次揭示乳酸-P300-ENO1乳酸化-TRIM21-VE-Cadherin轴在脓毒症内皮屏障破坏中的核心作用，阐明了代谢重编程与转录后调控的交叉对话。所设计的特异性抑制多肽为脓毒症血管保护策略提供了概念验证，但其体内药代动力学与潜在脱靶效应需进一步优化评估。
