编辑推荐：
本研究针对高危神经母细胞瘤（HR-NBL）缺乏有效治疗手段的临床困境，聚焦MYCN扩增这一关键致癌驱动因子，开展了PP2A磷酸酶药理激活剂的抗肿瘤机制探索。研究人员通过新型PP2A激活剂ATUX-1215/ATUX-5800处理神经母细胞瘤细胞及患者来源异种移植（PDX）模型，发现其可显著降低MYCN mRNA丰度、蛋白表达及Ser62位点磷酸化，并揭示其通过去磷酸化BRD4和RNA Pol II CTD、降低MYCN启动子区H3K27ac富集等多重表观遗传调控机制抑制肿瘤生长。该研究为直接靶向"不可成药"靶点MYCN提供了创新性治疗策略。
神经母细胞瘤（Neuroblastoma, NBL）作为儿童最常见的颅外实体肿瘤，虽仅占儿童癌症的7%-10%，却导致15%的儿童癌症相关死亡。高危神经母细胞瘤（HR-NBL）患儿缺乏可实现长期生存的有效治疗手段，其中MYCN原癌基因扩增是界定高危患者的关键分子标志。尽管MYCN直接靶向策略屡屡受挫，但其在正常组织中有限表达的特点仍使其成为理想治疗靶点。近年来，表观遗传调控机制的深入探索为间接靶向MYCN提供了新思路。
丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶2A（PP2A）作为一种重要的肿瘤抑制因子，其活性在神经母细胞瘤中受到抑制。本研究团队假设PP2A可能作为MYCN的上游调控枢纽，其药理激活或可通过对MYCN的多层次抑制发挥抗肿瘤效应。为验证这一假说，研究人员采用新型PP2A激活剂ATUX-1215和ATUX-5800，系统探究了PP2A激活对神经母细胞瘤的表型、表观遗传及体内抗肿瘤效果。
关键技术方法
研究采用MYCN非扩增（SK-N-AS、SH-EP）与扩增（SK-N-BE(2)、WAC(2)）神经母细胞瘤细胞系及MYCN扩增（COA3、COA6）与非扩增（COA129）患者来源异种移植（PDX）模型。通过PP2A活性检测、细胞活力测定（alamarBlue法）、克隆形成实验、Transwell迁移/侵袭实验评估表型变化；采用免疫印迹、实时定量PCR（RT-qPCR）、染色质免疫沉淀（ChIP-qPCR）分析分子机制；通过裸鼠皮下移植瘤模型验证体内疗效。
PP2A激活对神经母细胞瘤细胞的毒性作用
ATUX-1215和ATUX-5800处理显著提升SK-N-AS（20-50%）、SK-N-BE(2)（40-70%）及COA3 PDX细胞（70-90%）的PP2A活性。两种化合物均以浓度依赖性方式抑制细胞活力，LD50在细胞系中为22.5-31.9 μM，在PDX细胞中为6.8-13.2 μM。克隆形成实验显示PP2A激活剂可显著抑制单细胞增殖能力，表明PP2A再激活对神经母细胞瘤细胞具有直接细胞毒性效应。
PP2A激活抑制神经母细胞瘤细胞运动能力
转移性疾病是高危神经母细胞瘤的典型特征。Transwell实验表明，ATUX-1215和ATUX-5800处理显著降低SK-N-AS和SK-N-BE(2)细胞的迁移与侵袭能力，提示PP2A激活可能通过抑制肿瘤细胞的运动性延缓疾病进展。
PP2A激活剂调控MYCN表达与修饰
ATUX-1215和ATUX-5800处理显著降低SK-N-AS和SK-N-BE(2)细胞的MYCN mRNA丰度。免疫印迹分析显示，两种化合物可降低MYCN总蛋白表达及其Ser62位点磷酸化（该位点磷酸化可增强MYCN稳定性）。在COA3 PDX细胞中，ATUX-1215在高浓度下同样抑制MYCN磷酸化，表明PP2A激活通过转录及翻译后修饰双重途径负向调控MYCN。
BRD4去磷酸化与组蛋白修饰调控
PP2A激活导致BRD4蛋白去磷酸化。临床数据分析显示，BRD4基因表达与神经母细胞瘤患者无事件生存期及总生存期呈负相关。ChIP-qPCR实验证实，ATUX-1215和ATUX-5800处理降低MYCN启动子区H3K27ac富集。免疫印迹进一步显示H3K27乙酰化水平一致性下降，而H3K9ac和H3K122ac变化较不一致，提示H3K27ac是PP2A调控MYCN转录的关键表观遗传标记。
RNA聚合酶II CTD去磷酸化影响转录延伸
PP2A激活剂处理导致RNA聚合酶II羧基末端结构域（CTD）Ser5位点磷酸化水平降低，在SK-N-BE(2)和PDX细胞中表现尤为显著。Ser2磷酸化变化存在细胞系差异性，但整体趋势支持PP2A激活通过抑制转录起始与延伸过程参与MYCN repression。
体内实验验证抗肿瘤疗效
裸鼠移植瘤模型显示，ATUX-1215（75 mg/kg，每日两次口服）显著抑制SK-N-BE(2)肿瘤生长。肿瘤组织分析证实MYCN蛋白表达及磷酸化水平下降，同时伴随BRD4去磷酸化和H3K27ac减少。免疫组化显示ATUX-1215和ATUX-5800治疗组肿瘤细胞MYCN染色强度及Ki67阳性细胞比例降低，进一步支持PP2A激活的体内抗肿瘤效果。
结论与展望
本研究首次提供临床前证据，表明药理激活PP2A可通过多重机制抑制MYCN驱动的高危神经母细胞瘤：包括降低MYCN转录活性（通过BRD4去磷酸化及H3K27ac修饰）、抑制RNA聚合酶II介导的转录延伸、以及促进MYCN蛋白降解（通过Ser62去磷酸化）。值得注意的是，PDX模型对PP2A激活剂的高度敏感性提示其临床转化潜力。尽管单药治疗未能完全消除肿瘤，但PP2A激活剂与现有靶向药物（如BET抑制剂或EZH2抑制剂）的联合策略可能克服肿瘤耐药机制。该研究为突破MYCN直接靶向困境提供了创新性表观遗传调控方案，为高危神经母细胞瘤的精准治疗开辟了新路径。
