《Digestive and Liver Disease》：Nuclear miR-3920 expression in hepatocellular carcinoma is associated with stemness marker expression and poorer prognosis
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本研究聚焦肝细胞癌(HCC)中干细胞性标记物表达与侵袭性行为的关系，针对miRNA表达与HCC干细胞性关联不清的问题，研究人员开展了miR-3920与干细胞性标记表达关联性及临床意义研究。通过微阵列分析发现miR-3920在EpCAM阳性HCC中显著上调，LNA-ISH证实核内miR-3920高表达与干细胞标记(EpCAM/K19)表达、血管侵犯、高增殖活性显著相关，且是OS和DFS的独立不良预后因素。结果表明核定位miR-3920可能参与HCC干细胞性调控，为预后评估提供了新生物标志物。
肝细胞癌是全球范围内常见的恶性肿瘤，也是癌症相关死亡的主要原因之一，其五年总体生存率仍不理想。肝细胞癌具有高度的异质性，不同分子亚型的肿瘤在生物学行为和对治疗的反应上存在显著差异。其中，表达干细胞性相关标记物（如上皮细胞粘附分子EpCAM、角蛋白19K19等）的肝细胞癌亚型近年来备受关注。这类肿瘤通常表现出更强的侵袭性行为，更容易发生血管侵犯和转移，对常规的局部和系统治疗也更容易产生抵抗，导致患者预后较差。然而，目前对于microRNA（miRNA）表达与肝细胞癌干细胞性之间的关联仍不清楚，识别与干细胞性相关的miRNA并阐明其临床意义，对于深入理解肝细胞癌的发病机制和开发新的治疗策略具有重要意义。
为了回答这一问题，由Hyunjin Park、Seunghye Kim、Hyejung Lee、Hee Young Na、Jeong Eun Yoo和Haeryoung Kim组成的研究团队开展了一项深入研究，相关成果发表在《Digestive and Liver Disease》上。研究人员旨在识别与肝细胞癌干细胞性标记物表达相关的miRNA，并探讨其临床意义。
本研究主要采用了以下几种关键技术方法：首先，利用微RNA微阵列分析筛选在EpCAM阳性和阴性肝细胞癌中差异表达的miRNA。研究队列包括来自首尔国立大学盆唐医院的275例连续手术切除的肝细胞癌病例构建的组织微阵列样本。通过锁核酸荧光原位杂交技术评估miR-3920的表达水平和亚细胞定位。使用免疫组织化学法检测EpCAM、K19和Ki-67的表达。此外，还在肝细胞癌细胞系中通过实时定量PCR和蛋白质印迹分析探讨了miR-3920与EpCAM表达的功能关系。统计分析方法包括卡方检验、t检验以及Cox比例风险模型回归分析等。
3.1. MiR-3920在EpCAM阳性肝细胞癌中差异表达
通过微阵列分析比较EpCAM阳性和阴性肝细胞癌的miRNA表达谱，研究人员发现共有122个miRNA上调，30个miRNA下调。其中，miR-3920在EpCAM阳性肝细胞癌中表达显著上调，表明miR-3920与肝细胞癌的干细胞性特征相关。
3.2. 肝细胞癌和非肿瘤肝组织中miR-3920的原位分析
通过锁核酸荧光原位杂交技术对组织微阵列样本进行分析，研究人员发现虽然非肿瘤肝组织的总miR-3920信号计数高于肝细胞癌，但肝细胞癌肿瘤细胞中的核miR-3920信号计数以及核质信号比显著高于非肿瘤肝组织。进一步根据核质比中位数将肝细胞癌分为miR-3920高表达组和低表达组，分析显示miR-3920高表达的肝细胞癌与EpCAM和K19表达阳性、乙型肝炎病毒相关病因、微血管侵犯、主要血管侵犯以及较高的有丝分裂指数显著相关。
3.3. 生存分析
Kaplan-Meier生存分析显示，miR-3920高表达、肿瘤多发、肿瘤大小≥5厘米、存在微血管侵犯和主要血管侵犯的患者总体生存期显著缩短。miR-3920高表达、肿瘤多发和存在微血管侵犯的患者无病生存期也显著缩短。多变量分析表明，miR-3920高表达状态是总体生存期和无病生存期的独立预测因素。
3.4. 异位表达miR-3920的肝细胞癌细胞系中EpCAM的表达
为了探讨miR-3920是否调控EpCAM的表达，研究人员在EpCAM阳性和阴性的肝细胞癌细胞系中转染了miR-3920模拟物。结果表明，在EpCAM阴性的细胞系中转染miR-3920模拟物并未诱导EpCAM表达；在EpCAM阳性的细胞系中，异位表达miR-3920导致EpCAM表达略有下降，但变化不显著。
本研究通过综合运用微阵列分析、锁核酸荧光原位杂交和临床病理分析，首次揭示了miR-3920在肝细胞癌中的表达特征及其临床意义。研究发现，虽然肝细胞癌的总miR-3920表达水平低于非肿瘤肝组织，但其核内miR-3920表达水平和核质比显著升高，且这种核内富集现象与肝细胞癌的干细胞性特征密切相关。高核质比的miR-3920表达与EpCAM、K19等干细胞性标记物表达、微血管侵犯、主要血管侵犯、高有丝分裂指数等侵袭性临床病理特征显著相关，并且是患者不良预后的独立预测因素。
这些发现表明，miR-3920的核内定位可能在肝细胞癌的干细胞性维持和肿瘤进展中扮演重要角色，为理解肝细胞癌的恶性生物学行为提供了新的视角。虽然功能实验未能明确证实miR-3920直接调控EpCAM表达，但核内miR-3920的高表达与干细胞性特征和不良预后的强相关性提示，其核内定位可能具有重要的生物学功能。未来研究需要进一步阐明核内miR-3920的具体作用机制，以及它是否通过调控核内基因表达或其他核内过程来影响肝细胞癌的干细胞性。本研究为肝细胞癌的预后评估提供了潜在的生物标志物，也为针对干细胞性肝细胞癌亚型的治疗策略开发提供了新的思路。
