《Materials Today Bio》：Minimal immune response after transplantation of a cryopreserved human amniotic membrane on the ocular surface
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为解决人羊膜(hAM)移植后潜在免疫原性争议，本研究采用高灵敏度Luminex? Single Antigen及改良MAIPA技术，对23例眼表移植患者术后抗HLA-I/II及HLA-G抗体进行动态监测。结果显示仅1例出现新发抗体，未检测到抗HLA-G抗体，证实冷冻hAM移植具有极低体液免疫风险，为其临床安全性提供了关键实验依据。
在眼科领域，人羊膜（human amniotic membrane, hAM）作为一种重要的生物材料，已被广泛应用于眼表重建手术，如角膜溃疡修复、翼状胬肉切除后创面覆盖等。其独特的抗炎、抗纤维化和促进上皮再生的特性，使其成为眼表疾病治疗的理想选择。然而，尽管hAM在临床应用中表现出良好的耐受性，关于其免疫原性的科学证据却相对有限。自1981年Akle等人的开创性研究以来，普遍认为hAM具有低免疫原性，但当时的检测技术灵敏度有限，且近年来发现hAM高表达非经典人类白细胞抗原G（HLA-G），这种分子在免疫调节中扮演着关键角色，但其作为同种异体抗原的潜在免疫风险尚未在临床移植背景下得到系统评估。这构成了当前研究领域的一个重要知识空白。
为填补这一空白，研究团队在《Materials Today Bio》上发表了题为“Minimal immune response after transplantation of a cryopreserved human amniotic membrane on the ocular surface”的研究论文。本研究旨在利用现代高灵敏度抗体检测技术，前瞻性地评估冷冻保存hAM移植于眼表后，引发受体产生抗HLA I类、II类以及抗HLA-G抗体的情况，从而为hAM的免疫安全性提供更高级别的循证医学证据。
为开展此项研究，研究人员主要应用了几项关键技术方法。研究纳入了23例因各种眼表疾病需要接受hAM移植手术的患者，形成前瞻性临床队列。血清样本采集自移植当天（M0）、术后1个月（M1）和3个月（M3）。抗HLA I类和II类抗体的检测采用了国际公认的高灵敏度Luminex? Single Antigen技术，能够精确检测并定量针对上百种HLA抗原的特异性抗体，结果以平均荧光强度（MFI）表示。针对非经典HLA分子HLA-G的抗体检测，研究团队则创新性地改良了基于ELISA原理的单克隆抗体特异性血小板抗原固定术（Monoclonal Antibody specific Immobilization of Platelet Antigen, MAIPA），通过使用转染了不同HLA-G等位基因（HLA-G*01:01, *01:04, *01:06）的K562细胞系以及特异性捕获抗体MEM-G/9，建立了一套特异性的抗HLA-G抗体检测方法。此外，还计算了虚拟群体反应性抗体（virtual Panel Reactive Antibody, vPRA）以评估患者的整体致敏状态。
患者特征
本研究共纳入23例患者，男性占65%，中位年龄62岁。最主要的手术适应症为翼状胬肉（87%），多采用“嵌植”（inlay）技术。部分患者有输血史（17%）或妊娠史（26%）。所有患者在3个月随访期内均未观察到严重的局部炎症反应或临床排斥现象。通过对患者基线资料的详细分析，为后续免疫学结果的解读提供了重要的临床背景。
抗HLA class I, II and G分析
在抗经典HLA抗体方面，研究结果显示绝大多数患者（16/23）在移植后1个月和3个月，其抗体谱相较于基线未发生改变。仅在一例患者（患者17）中观察到新出现的抗HLA-B82抗体。另有6例患者出现了预存抗体MFI值显著升高（>50%）的情况，其中一例为短暂性升高。然而，由于无法获取供体hAM的HLA分型资料，这些MFI的升高难以明确归因于供体特异性的免疫应答，更可能与非特异性因素（如炎症状态）或检测方法本身的波动有关。虚拟PRA分析也显示，尽管个别患者的vPRA值因抗体MFI在阈值附近波动而有所变化，但整体上未观察到有临床意义的致敏状态改变。在抗HLA-G抗体方面，所有患者在移植前（M0）及移植后（M1, M3）的血清样本中，均未确认检测到抗HLA-G抗体的存在。虽有少数样本在初筛中出现可疑信号，但经过特异性鉴定试验后被证实为假阳性。
讨论部分对上述结果进行了深入分析。关于经典HLA抗体，研究者认为，尽管hAM表达HLA I类抗原，但其低免疫原性可能源于组织的低血管化特性以及hAM本身富含的免疫调节分子，特别是HLA-G。HLA-G通过与免疫细胞上的抑制性受体（如ILT2, ILT4）结合，能够诱导局部免疫耐受微环境，这可能是抑制同种异体抗体产生的重要原因。对于未能检测到抗HLA-G抗体，研究者分析了多种可能：HLA-G基因多态性较低，供受体间不匹配的概率小，从而降低了同种免疫的可能；此外，也可能与检测技术的灵敏度、样本反复冻融的影响有关。研究者也指出，本研究的局限性在于缺乏供体hAM的HLA分型信息，限制了对抗体变化是否具有供体特异性的判断。
结论部分总结道，本研究首次在临床环境中采用高灵敏度技术系统评估了冷冻hAM眼表移植后的体液免疫反应。主要发现是患者针对HLA I类、II类以及HLA-G的抗体反应极其微弱或缺失。这一结果有力地支持了hAM移植具有低免疫原性的传统观点，为其长期临床应用的安全性提供了重要的现代实验室证据，也与数十年来的良好临床耐受性观察结果相一致。
