长链非编码RNA（lncRNA）NPSR1-AS1通过miR-199a-3p影响膀胱癌的恶性生物学行为，并探讨了尿液中提取的lncRNA NPSR1-AS1的临床应用价值

《Urologic Oncology: Seminars and Original Investigations》：LncRNA NPSR1-AS1 affects the malignant biological behavior of bladder cancer through miR-199a-3p and the clinical value of urine-derived lncRNA NPSR1-AS1

lncRNA NPSR1-AS1通过海绵miR-199a-3p调控膀胱癌（BCa）细胞增殖、迁移和凋亡，其尿液表达水平可作为诊断标志物并与患者预后相关。

何伟静|文勇|秦慧玲

南京浦口人民医院泌尿外科，中国南京

摘要

背景

长链非编码RNA（lncRNA）表达的改变与多种人类肿瘤的发生和发展显著相关。

目的

探讨lncRNA NPSR1-AS1影响膀胱癌的潜在机制，以及其诊断和预后价值。

材料与方法

膀胱癌相关数据来源于GEO数据库。使用RT-qPCR检测BCa组织、细胞系和尿液中lncRNA NPSR1-AS1和miR-199a-3p的表达。在UMUC3、T24细胞中测试了细胞增殖、迁移和凋亡等细胞功能。利用萤光素酶报告基因、RIP和Spearman相关性分析研究分子间的相互作用。通过ROC、K-M和COX回归分析评估lncRNA NPSR1-AS1的临床价值。

结果

在BCa组织细胞系和尿液中，lncRNA NPSR1-AS1的表达水平较高，而miR-199a-3p的表达水平降低。lncRNA NPSR1-AS1通过结合miR-199a-3p影响BCa的恶性生物学行为。细胞功能实验表明，沉默lncRNA NPSR1-AS1可以抑制UMUC3、T24和RT4细胞的增殖、迁移和凋亡，而抑制miR-199a-3p则可逆转这种效应。临床上，lncRNA NPSR1-AS1可能作为BCa的诊断和预后标志物。

结论

lncRNA NPSR1-AS1靶向miR-199a-3p并影响BCa的进展。此外，它可以作为BCa的生物标志物。

引言

膀胱癌（BCa）是全球第十大常见恶性肿瘤[1,2]。近年来，其发病率在人群中持续上升。其中，男性发病率是女性的3.3倍，50岁以上患者占比超过80%[3,4]。组织学上，90%的病例表现为尿路上皮癌[5]。根据肌肉层侵袭情况，可分为非肌层浸润性膀胱癌（NMIBC）和肌层浸润性膀胱癌（MIBC）[6]。后者的5年生存率仅为60%，一半患者在手术后会发生转移[7,8]。目前的治疗主要采用经尿道肿瘤切除术结合BCG灌注和根治性膀胱切除术[9]。然而，这两种方法存在一定局限性。BCG灌注的响应率仅为50%-70%，而根治性手术会导致20%-40%的患者出现尿失禁和性功能障碍等严重并发症[10]。此外，研究表明2021年U nMiBC评分模型可以区分不同风险的BCa患者，但在接受再次经尿道切除术和膀胱内BCG治疗的患者中效果较差[11]。在诊断方面，尽管膀胱镜检查仍是金标准，但其侵入性导致患者依从性较差[12]。尿液细胞学检查的特异性高达90%，但敏感性低于40%[13]。这一临床困境迫切需要开发更精确的无创诊断工具和靶向治疗策略。目前，无创液体活检也取得了一定的研究成果。例如，研究表明，在接受经尿道膀胱肿瘤切除术（TURBT）的非肌层浸润性膀胱癌（NMIBC）患者中，术前中性粒细胞与淋巴细胞比值（NLR）可能是一个有用的血液生物标志物，有助于改善患者风险分层并辅助临床治疗和随访计划[14]。基于此，我们非常有信心寻找有效的BCa液体活检生物标志物。

研究表明，长链非编码RNA（lncRNAs）可通过竞争性内源性RNA（ceRNA）机制调节microRNA（miRNAs）的活性，从而影响癌症的关键通路[15,16]。lncRNA MIR200CHG通过靶向miR-200c抑制EMT，进而影响胃癌的进展[17]。lncRNA SNAI3-AS1作为miR-27-3p和miR-34a-5p的结合伴侣，激活PEG10，从而影响肝细胞癌的增殖和迁移[18]。lncRNA SNHG4 spongelet-7a调节RRM2，影响前列腺癌的进展和对enzalutamide的敏感性[19]。lncRNA MACC1-AS1靶向miR-579-3p，促进小细胞肺癌细胞的生长[20]。我们之前的研究发现，lncRNA NPSR1-AS1在BCa组织和尿液中异常高表达。生物学研究表明，它可能与miR-199a-3p具有较高的结合稳定性。然而，它们之间的具体分子相互作用机制及其与膀胱癌的关系尚未在文献中报道。

本研究旨在揭示lncRNA NPSR1-AS1/miR-199a-3p轴在BCa恶性进展中的分子机制，并评估其在尿液检测中的临床应用价值，为新型诊断标志物和靶向疗法的开发提供理论基础。

患者

本研究选取了2019年5月至2020年5月期间入住南京浦口人民医院的膀胱癌患者。该研究已获得南京浦口人民医院伦理委员会的批准，所有患者均签署了书面知情同意书。纳入标准：（1）通过病理检查确诊为膀胱癌；（2）患者临床资料完整；（3）为首次诊断。排除标准：（1）

lncRNA NPSR1-AS1的选择及其在组织和细胞系中的表达

我们使用“lncRNA”和“膀胱癌”作为关键词在GEO数据库中搜索，获得了3个与膀胱癌相关的数据集：GSE185904、GSE190079和GSE249353。首先，我们从这3个数据集中提取所有lncRNAs，然后分别筛选出每个数据集中P值<0.05且log2FoldChange > 1的lncRNAs。最后，绘制了3个数据集中lncRNAs的维恩图，共得到2个共同的lncRNAs，即lncRNA NPSR1-AS1和LINC01378（图1A）。

讨论

膀胱癌是一种侵袭性肿瘤，在泌尿生殖系统恶性肿瘤中发病率排名第二[22]。这种癌症可发生在任何年龄段的群体中，具有较高的发病率和死亡率[23]。其发病机制复杂，涉及遗传和环境等因素[24]。BCa的特点是发病隐匿，许多患者在确诊时已处于晚期[25]。

结论

总之，lncRNA NPSR1-AS1可影响BCa细胞的增殖、迁移和凋亡能力。它主要通过调节miR-199a-3p发挥作用，有可能成为BCa治疗的分子靶点。在临床诊断和预后管理方面，从尿液中检测到的lncRNA NPSR1-AS1可以区分健康个体和BCA患者。同时，其表达水平与患者的总体生存率相关

研究方案批准

该研究方案已获得南京浦口人民医院伦理委员会的批准。所有涉及人类参与者的研究程序均符合1964年赫尔辛基宣言及其后续版本的要求。

知情同意

确保了参与者了解研究情况，并从所有参与研究的个体中获得了书面知情同意。

作者贡献声明

何伟静：撰写——初稿、方法学、实验设计、数据分析、概念构建。文勇：撰写——审阅与编辑、验证、监督、软件使用、资源协调。秦慧玲：概念构建、数据管理、数据分析、实验设计、撰写——审阅与编辑。

利益冲突声明

作者声明没有已知的财务利益冲突或个人关系可能影响本文的研究结果。