基于色散干涉混合光谱仪的高效拉曼显微成像技术

《Optics and Lasers in Engineering》:High efficiency Raman microscopic imaging based on a dispersion-interference hybrid spectrometer

【字体: 时间:2026年01月21日 来源:Optics and Lasers in Engineering 3.7

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  提出基于色散-干涉混合架构的高效拉曼显微成像系统,通过集成阿米西棱镜与萨格纳克干涉仪,实现无狭缝条件下光谱剪切调控,兼顾高吞吐量和10 cm?1点分辨率。采用1024×1024像素EMCCD相机和一维推扫扫描策略,显著提升成像速度,适用于材料分析、生物检测等快速拉曼 hyperspectral成像场景。

  
黄慧通|孟欣|蒋小红|王傲|徐奕轩|刘志彪|刘奕轩|李建新
南京理工大学电子光学工程学院,中国南京210094

摘要

光通量和光谱分辨率是实现快速准确拉曼显微成像的两个关键参数。然而,传统方法往往在这两个性能之间存在权衡。为了解决这一限制,本文提出了一种基于色散-干涉混合光谱架构的高效拉曼显微成像系统。通过将Amici棱镜集成到Sagnac干涉仪中,该系统无需使用入射狭缝即可实现光谱剪切控制,从而同时具备高通量和良好的光谱分辨率。使用785纳米激光器,该系统对Nd:Y?Al?O??陶瓷、萤石晶体以及金基底上的SERS增强4-氨基噻吩样品进行了测试,获得了10 cm?1的点光谱分辨率和25 cm?1的全宽半高(FWHM)分辨率。结合1024 × 1024像素的EMCCD相机,该系统支持区域成像,并采用一维推扫扫描策略高效获取整个视野,显著提高了成像速度,优于传统的逐点扫描方法。实验结果表明,该系统具有高通量、高分辨率和快速拉曼高光谱成像能力,具有在材料分析、生物检测和化学成像方面的潜在应用。

引言

拉曼散射显微镜作为一种强大的工具,因其非接触、无标记和高度针对分子组成的特性而受到重视。它在材料表征、生物医学诊断和环境监测中得到了广泛应用[[1], [2], [3], [4], [5], [6]]。然而,拉曼散射截面通常比瑞利散射弱10?到10?倍,导致拉曼信号极其微弱,常常被强烈的瑞利背景或荧光噪声所掩盖[[7], [8]]。
为了有效检测拉曼信号,传统的拉曼成像系统通常采用基于光栅或棱镜等色散元件的逐点扫描方案[[9], [10], [11], [12], [13], [14], [15], [16], [17], [18], [19], [20]]。在这些系统中,拉曼信号通过色散元件进行光谱分散,然后使用狭缝和探测器阵列在频率域中记录。虽然这种配置可以实现高光谱分辨率,但存在几个限制:(1)狭缝的存在显著降低了光通量;(2)点扫描成像本身速度较慢。例如,扫描一个100 × 100 μm的区域,以1 μm的步长和每个像素0.5秒的积分时间,可能需要至少几十分钟才能获取一张图像;(3)采集过程对系统不稳定性和样品漂移非常敏感,不适合快速成像和大视野应用。
相比之下,静态傅里叶变换成像光谱仪(FTIS)更适合高光谱显微成像。这些系统通常使用焦平面阵列探测器记录干涉图,并通过傅里叶变换提取光谱信息。凭借高通量和并行采集的优势,FTIS能够同时捕获大量像素的光谱信息[[21], [22], [23], [24], [25], [26]]。Wadduwage提出了一种近共路干涉仪设计,将傅里叶变换成像光谱与宽场显微镜相结合,通过共路布局显著提高了机械和相位稳定性,并有效抑制了由环境振动引起的干涉条纹漂移[27]。Müller将光片照明引入拉曼显微镜,开发了光片拉曼微光谱技术,大幅减少了3D实时成像过程中的光漂白和光损伤,并提高了大体积样品的信噪比(SNR)[28]。Ardini构建了一个宽场傅里叶变换拉曼显微镜平台,能够快速检测和分类微塑料颗粒[29],后来将其扩展为一个高通量、多模态的宽场FT-Raman系统,无需逐点扫描即可同时获取化学成分和形态信息,适用于环境监测和快速筛查[30]。Jurowski等人开发了一种集成多模态显微镜(AIRsight),结合了拉曼和傅里叶变换红外(FTIR)光谱技术,能够在单个平台上同时获取互补的振动光谱信息,增强了复杂材料和生物样品的多维表征[31]。为了进一步提高光谱采集速度和功能集成,Sinjab提出了一种快速、宽带的傅里叶变换相干拉曼系统,与多模态非线性光学显微镜相结合,能够同时执行CARS、SRS、SHG等成像模式,实现全面的分子和化学映射[32]。Smith通过引入低频相干拉曼成像方法解决了高散射样品的挑战,即使在浑浊介质中也能保持高的光谱SNR和结构分辨率[33]。
尽管有这些优势,静态FTIS系统在应用于高分辨率拉曼成像时仍面临几个挑战:(1)大多数系统通过两束光之间的空间剪切产生固定的光程差(OPD)分布,但缺乏调节剪切参数的灵活性,从而限制了可实现的光谱分辨率;(2)记录的干涉图的横轴对应于OPD分布而非实际波长,使系统对机械和相位不稳定性非常敏感;(3)光谱重建的准确性严重依赖于干涉条纹的质量,非线性OPD分布或条纹畸变(如曲率和倾斜)会导致光谱偏移和失真,影响分辨率和可靠性。
为了解决这些挑战,本文提出了一种基于色散-干涉混合架构的拉曼显微成像系统,这种方案在保持高光通量的同时实现了高光谱分辨率,为快速高效的拉曼高光谱成像提供了可行的策略。

色散剪切干涉原理

在经典的傅里叶变换成像光谱仪(FTIS)中,光谱分辨率主要由干涉条纹对应的最大OPD决定。当两条光谱线的条纹相差一个条纹周期时,它们被认为是可分辨的。如果可以对不同波长的OPD进行差分调制,那么产生的条纹频率将更加明显。我们在之前的工作中引入了“光程压缩”概念来描述这一现象[34]。

拉曼干涉的光学设置

光学系统的构建和对齐基于图1所示的配置和相应的仿真结果。如图5所示,实验装置由四个主要模块组成:
  • (1)照明模块。
  • 拉曼激发由785纳米连续波二极管激光器提供,最大输出功率为450毫瓦。此外还集成了一盏卤素灯作为宽带照明源,以帮助样品聚焦和定位。
  • (2)信号收集模块。
  • 实验参数

    为了验证所提出的色散-干涉混合拉曼成像系统的性能,选择了三种代表性样品:Nd:Y?Al?O??陶瓷、萤石和通过金SERS基底增强的4-氨基噻吩。这些样品分别对应于典型的无机晶体材料、矿物样品和有机分子系统,从而能够评估系统在不同光谱特性下的成像能力。

    讨论

    本研究表明,所提出的基于Amici棱镜的色散-干涉混合拉曼显微成像系统在实验中实现了高光谱分辨率和成像效率。结果验证了光程压缩干涉光谱理论在拉曼光谱范围内的适用性。与基于光栅或纯干涉的传统拉曼成像方法相比,该系统在光学性能方面具有明显优势。

    结论

    本文提出并实验验证了一种基于Amici棱镜的色散-干涉混合拉曼显微成像系统。通过将角色散引入Sagnac干涉配置,该系统实现了干涉和色散剪切的联合控制,在无狭缝条件下实现了高通量和高分辨率。实验结果表明,在785–1000纳米的拉曼光谱范围内,该系统获得了平均光谱

    数据可用性

    本文所呈现的结果数据目前尚未公开,但可根据合理请求从作者处获取。

    CRediT作者贡献声明

    黄慧通:撰写 – 审稿与编辑,撰写 – 原稿,可视化,验证,软件,资源,方法论,研究,正式分析,数据管理,概念化。孟欣:监督,资源获取。蒋小红:监督,资源。王傲:资源,研究。徐奕轩:撰写 – 审稿与编辑,监督。刘志彪:研究。刘奕轩:监督。李建新:监督,软件,项目管理,资金

    利益冲突声明

    作者声明他们没有已知的可能会影响本文所述工作的财务利益或个人关系。

    资助

    国家自然科学基金
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