河口细菌Pseudoalteromonas sp. S-2的生物防治潜力:其对微囊藻(Microcystis aeruginosa)的杀藻活性及其作用机制

《Biocatalysis and Agricultural Biotechnology》:Biocontrol potential of estuarine bacterium Pseudoalteromonas sp. S-2: algicidal activity and mechanism against Microcystis aeruginosa

【字体: 时间:2026年01月21日 来源:Biocatalysis and Agricultural Biotechnology 3.8

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  有害蓝藻水华的微生物控制策略研究:以假交替单胞菌S-2为例,发现其2%(v/v)浓度下96小时抑藻率达91.7%,通过氧化应激破坏光合系统关键基因(psaB、psbD、rbcL)及膜结构,环境耐受性强(-80℃~120℃;pH4-12)。

  
宁丁|钱恩珠|范强燕|郑祺王|于浩宋|赵王|英王|于娇马|培科高|任军王
山东省曲阜师范大学生命科学学院,曲阜273165,中国

摘要

有害蓝藻水华的增殖,特别是微囊藻Microcystis aeruginosa),对全球水生生态系统和水资源安全构成了重大威胁。微生物控制策略作为一种环境可持续且具有针对性的解决方案,引起了广泛的研究兴趣,用于微囊藻水华的管理。本研究调查了河口细菌Pseudoalteromonas S-2对微囊藻的杀藻活性及其作用机制。结果表明,在2%(v/v)的浓度下,S-2在96小时内通过间接机制使微囊藻的死亡率达到了91.7%。生理和分子分析显示,S-2的无细胞上清液诱导了微囊藻的氧化应激,破坏了其光合作用、碳水化合物代谢和蛋白质合成。具体而言,S-2调节了抗氧化酶的活性,导致膜损伤(表现为丙二醛积累增加),并下调了关键的光合作用基因(psaBpsbDrbcL)的表达。扫描电子显微镜(SEM)观察显示微囊藻出现了渐进性的形态变化,最终导致细胞裂解。此外,这种杀藻化合物在广泛的温度范围(-80至120°C)和pH值(4至12)内表现出显著的稳定性。研究还确定了发挥最大杀藻效果的最佳环境条件。这些发现表明Pseudoalteromonas S-2是一种有前景的环境友好型生物控制剂,可用于缓解蓝藻水华。

引言

预计全球变暖将显著增加蓝藻水华的频率,从而导致水质恶化、生物多样性威胁和经济损失。微囊藻作为最常见的形成水华的蓝藻之一,已在全球108个国家和地区引发水华(McLean, 2013; Wang et al., 2016)。这些水华的持续扩展可能带来比之前认识到的更严重的健康风险(Du et al., 2019; Wang et al., 2020)。因此,开发控制蓝藻水华的策略已成为全球科学研究的重点(Xiao et al., 2018)。由于传统修复方法的局限性,人们开发了利用水生植物和杀藻微生物的生态控制技术(Jeong et al., 2008)。这些环境友好且生态兼容的方法被认为是最可持续的水华控制方案。值得注意的是,杀藻细菌由于其高效抑制蓝藻生长的特定机制,已成为当前生物控制研究的焦点(Nishu et al., 2019)。自1975年发现黏细菌Myxobacteria)作为第一种能够分解藻类的细菌以来(Daft et al., 1975),在多种自然环境中发现了许多具有杀藻特性的细菌物种,并对其抑制机制进行了广泛研究。这些包括产碱菌属Alcaligenes)(Manage et al., 2000)、Pseudoalteromonas(Mitsutani et al., 2001)、假单胞菌属Pseudomonas)(Ren et al., 2009)、链霉菌属Streptomyces)(Kong et al., 2013)、弧菌属Vibrio)(Li et al., 2014)和不动杆菌属Acinetobacter)(Yi et al., 2015)、芽孢杆菌属Bacillus)(Xu et al., 2021)。
研究表明,杀藻化合物会引发藻类细胞的生理和形态变化,最终导致细胞死亡(Zhang et al., 2020)。这些代谢产物在细胞裂解过程中干扰了多种细胞过程,特别是影响氧化应激标志物、蛋白质浓度和抗氧化酶的功能(Zhou et al., 2016)。细胞防御系统利用超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)等抗氧化酶来中和过量的自由基,从而保护细胞完整性(Elbaz et al., 2010)。微囊藻Microcystis aeruginosa)是微囊藻属中的一种蓝藻,近年来成为中国湖泊和池塘中有害藻华的主要致病菌。该物种产生的微囊藻毒素具有多系统毒性,包括肝毒性、神经毒性和生殖毒性,对水生生态系统和人类健康构成威胁(Du et al., 2019; Kong et al., 2022)。其光合作用系统,尤其是对环境敏感的光系统II(PSII)复合体,促进了这一过程。类囊体色素,主要是叶绿素a(Chl a)和类胡萝卜素,对于类囊体膜中的光捕获和能量转化至关重要(Zhang et al., 2021)。尽管如此,关于藻类细胞死亡过程中光合作用系统的变化仍研究不足。鉴于光合作用是大多数自养生物的基本能量生成过程,研究杀藻化合物如何影响光合作用效率和系统响应对于阐明其作用机制至关重要。多种细菌菌株已被证明可以通过不同的机制破坏蓝藻的光合作用。假单胞菌属 QJX-1通过降低微囊藻的光系统II的最大量子产率和光合作用电子传输速率来影响其光化学性能(Qi et al., 2021),而Raoultella S1的上清液则在基因水平上发挥作用,下调与光系统相关的基因表达,从而降低光合作用效率和电子传输(Li et al., 2021)。这些观察结果共同表明,光合作用系统的受损是细菌介导的藻类裂解的关键机制。
微囊藻Microcystis aeruginosa)是微囊藻属中的一种蓝藻,近年来成为中国湖泊和池塘中有害藻华的主要致病菌。该物种产生的微囊藻毒素具有多系统毒性,包括肝毒性、神经毒性和生殖毒性,对水生生态系统和人类健康构成威胁(Du et al., 2019)。虽然杀藻细菌对蓝藻的降解作用已得到广泛研究,但关于蓝藻对这些细菌的生理反应及其抑制机制的研究仍有限。为填补这些知识空白,本研究采用了Pseudoalteromonas S-2(一种有前景的蓝藻降解菌)作为杀藻剂,微囊藻作为目标菌株。研究检测了微囊藻的多种生理参数,包括细胞内蛋白质和碳水化合物水平以及酶活性。为阐明藻类细胞死亡与光合作用受损之间的联系,研究量化了与光合作用相关基因的表达模式。此外,环境优化发现了能够增强对微囊藻杀藻效果的协同温度、pH值和光照条件。本研究旨在加深对微囊藻与杀藻细菌相互作用的理解,为微生物水华控制提供理论基础,并为杀藻细菌在实际应用中的使用提供科学支持。

章节摘录

藻类培养

无污染菌株微囊藻 FACHB-905由中国上海Photolang生物技术有限公司提供。在用作接种物之前,该菌株在灭菌的BG11培养基中培养了15天,以达到对数生长阶段。培养条件为25°C温度下,光照强度为2000 lx,光照周期为14:10小时。

菌株与培养

Pseudoalteromonas S-2菌株是从河口沉积物中分离得到的

S-2菌株的杀藻效率

如图1所示,S-2菌株的培养基对微囊藻的增殖没有抑制作用。为了评估杀藻活性,将微囊藻细胞暴露于不同浓度的S-2中。该菌株表现出浓度和时间依赖性的杀藻效果(图1)。在0.5%(v/v)的接种浓度下,S-2表现出中等程度的抑制作用(约40-50%)。然而,更高浓度的S-2在120小时内导致了显著的细胞裂解:2%和5%的S-2

CRediT作者贡献声明

任军王:资金获取。赵王:概念构思。英王:监督。于娇马:软件处理。培科高:写作——审稿与编辑,资源准备。钱恩珠:正式分析。范强燕:项目管理。郑祺王:监督。于浩宋:方法学研究。宁丁:写作——初稿撰写,实验设计,数据整理

未引用的参考文献

Ivanova, 2000.

利益冲突

作者声明与本手稿的发表无关任何利益冲突。

数据可用性声明

本研究期间生成或分析的数据集可应要求向通讯作者索取。

利益冲突声明

本手稿未在其他地方部分或全部发表,也未被其他期刊接受审稿。我们已阅读并理解了贵期刊的政策,认为本手稿和研究内容均不违反任何规定。不存在需要声明的利益冲突。

致谢

本研究得到了山东省自然科学基金(ZR2024QC005;ZR2020MC042;ZR2019BB040)和国家自然科学基金(32470125;31971503;31901188)的支持。
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