《Advanced Science》：Integrated Transcriptomics Reveals Evolutionary Trajectories and Cell Density-Dependent Mechanisms in Aldosterone-Producing Adenomas
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本研究通过整合单细胞/细胞核与空间转录组学技术，系统解析了醛固酮腺瘤（APA）及其前体微结节（APM）的细胞异质性、免疫微环境重塑及演化路径。研究发现APA存在两条发育轨迹（直接zG→APA与逐步zG→APM→APA），并首次揭示Hippo通路效应因子TAZ通过调控铁死亡敏感性参与APA进展，为原发性醛固酮增多症的靶向干预提供新视角。
2.1 APA与APM的细胞类型组成与多样性
通过整合13例APA样本和2例APM样本的单细胞/细胞核RNA测序数据，研究鉴定出23个细胞簇，包括APA/APM细胞、肾上腺皮质细胞（zG、zF、zR）、髓质细胞、祖细胞、淋巴系细胞、髓系细胞、血管内皮细胞及成纤维细胞等。细胞密度分析显示，APA组织中髓系细胞和成纤维细胞显著富集，而APM以肾上腺皮质细胞为主。基因型分析发现，ATP1A1突变型APA中血管内皮细胞比例更高，提示不同驱动突变可塑造特异性肿瘤微环境。
2.2 APA中的免疫抑制性肿瘤微环境
髓系细胞亚群分析识别出单核细胞、树突状细胞及两个巨噬细胞群体（Macro-1和Macro-2）。Macro-2高表达CD209、EGR2等M2型标记基因，且GAS6-MERTK配体-受体对在APA细胞中的通讯概率显著高于APM，提示M2型巨噬细胞通过免疫抑制机制促进APA进展。空间转录组学进一步验证了CD163+巨噬细胞与CYP11B2+APA细胞的共定位现象。
2.3 APA中的细胞通讯网络与关键信号通路
CellChat分析显示APA细胞通过NCAM、CDH、CADM等黏附分子通路增强细胞间通讯。在KCNJ5突变型APA中，钙黏蛋白（CDH）信号通路尤为活跃。分子对接证实GAS6-MERTK结合能低至-256.82 kcal·mol?1，表明该互作在介导免疫抑制中起关键作用。
2.4 基因调控网络揭示APA与APM中的关键转录因子
SCENIC分析识别出APA特异性调节子（如LEF1+、MESI1+），而APM细胞中JUN、FOSB等早期应激反应相关转录因子活跃。共享转录因子（如ATF4、ETV3）在APA发育全程持续激活，可能通过钙信号通路协同驱动肿瘤发生。
2.5 伪时间轨迹分析表明APM是APA的前体细胞
轨迹分析显示zG细胞处于发育起点，APA细胞为终末状态。在KCNJ5突变型APA中存在双路径分化（直接zG→APA或经APM阶段），而非KCNJ5突变型仅存在zG→APM→APA的逐步路径。CytoTRACE评分提示zG细胞干性最高，伴随分化进程，脂质氧化和铁死亡相关基因表达逐渐下降。
2.6 APA进展中氧化应激与细胞黏附的动态调控
根据CytoTRACE评分将APA细胞分为祖细胞样状态（高干性）和成熟状态。祖细胞样APA高表达氧化应激应答基因（如RHOB、FOS），而成熟APA中CYP11B2、CDH2等醛固酮合成及细胞黏附基因上调。体外实验证实低细胞密度增强HAC15细胞对铁死亡诱导剂RSL3的敏感性，且该过程由Hippo通路效应因子TAZ核转位调控。
2.7 Hippo通路效应因子TAZ调控人HAC15细胞铁死亡
TAZ（而非YAP）是HAC15细胞中主要的Hippo通路协调因子。低细胞密度促进TAZ核定位并增强铁死亡敏感性，而TAZ敲除可逆转此现象。空间转录组数据进一步显示，TAZ表达与铁死亡活性在APA进展中呈负相关，证实其在肾上腺肿瘤代谢适应中的核心地位。
3 讨论
本研究多组学整合分析揭示了APA肿瘤生态系统的演化规律，强调细胞密度通过Hippo-TAZ轴调控铁死亡的新机制，为理解肾上腺肿瘤发生提供了高分辨率图谱。
