《Frontiers in Immunology》：Endogenous CD5L controls the metabolic and inflammatory state of human macrophages
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本研究揭示了内源性CD5L通过重塑巨噬细胞脂质组、调控核受体RORα活性，进而影响NF-κB信号通路及炎症因子表达的分子机制。通过CRISPR/Cas9技术构建CD5L基因敲除的THP-1巨噬细胞模型，结合转录组与脂质组学分析，发现CD5L缺失导致炎症相关基因（如TNF、IL-1β）表达显著下调，并诱导抗炎分子CD52上调。该研究为代谢性炎症疾病（如动脉粥样硬化）的靶向治疗提供了新视角。
引言
先天免疫信号通过感知细胞代谢变化应对病原体威胁。胆固醇代谢物可作为肝X受体（LXR）等核受体的配体，连接胆固醇稳态与炎症反应。CD5L（又称AIM或Spα）作为清道夫受体样分子，通过调节细胞代谢参与炎症调控，但其在人巨噬细胞中的内源性功能尚不明确。本研究通过敲除THP-1单核细胞系中的CD5L基因，探讨其对巨噬细胞炎症状态的影响。
结果
CD5L调控THP-1细胞的炎症状态
在分化后的巨噬细胞样CD5L敲除（CD5L-KO）细胞中，基础状态下NF-κB调控基因（如TNF、IL-1β）表达显著降低。尽管LPS刺激后诱导幅度与对照组相似，但突变细胞中炎症因子mRNA水平仍低于对照组。ELISA检测进一步证实CD5L-KO细胞在LPS刺激后3小时和6小时分泌的IL-6蛋白水平显著降低（图2D），支持CD5L在人类巨噬细胞中发挥促炎作用。
CD5L缺失重塑巨噬细胞转录组
RNA-seq分析显示，CD5L敲除导致1,165个基因表达差异（FDR<0.05），其中879个基因下调。KEGG富集分析表明，TNF信号通路、NF-κB通路等炎症相关通路显著受影响（图3C）。例如，TNF通路中28个基因表达下调，仅FAS（TNFRSF6）上调（图4），提示CD5L缺失使巨噬细胞进入持续性低炎症状态。
CD5L介导脂质组重塑
UPLC-ESI-TOF质谱分析显示，CD5L-KO细胞中饱和脂肪酸（SFA）侧链比例增加，高度多不饱和脂肪酸（PUFA）水平上升（图5B、5C）。Filipin染色显示突变细胞内游离胆固醇积累增加（图5D），表明CD5L参与巨噬细胞脂质组成调控。
CD5L不通过脂肪酸合酶（FASN）发挥作用
尽管小鼠研究中CD5L通过抑制FASN调控脂代谢，但在人巨噬细胞中，CD5L敲除并未引起FASN活性显著变化（图6），提示其脂质重塑功能可能存在其他机制。
RORα位于CD5L信号下游
在CD5L/RORα双敲除（DKO）细胞中，炎症因子表达水平与RORα单敲除细胞相似（图2A–2D），且RNA-seq聚类分析发现CD5L与RORα缺失细胞的基因表达呈反向调控（图7A–7E）。这些结果支持CD5L可能通过调节RORα配体可用性影响炎症信号，但ROR反应元件（RORE）报告基因实验未检测到CD5L依赖的转录活性变化，需进一步验证二者直接关联。
CD5L调控单细胞-基质相互作用相关因子
在未分化的单核细胞中，CD5L敲除导致基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9表达下调，神经细胞黏附分子NCAM-1上调（图8B）。这些分子参与单核细胞迁移与动脉粥样硬化进程，提示CD5L可能通过调控细胞迁移影响疾病发展。
CD5L缺失诱导抗炎分子CD52
CD5L敲除使CD52在未分化和分化细胞中分别上调3.6倍和6.34倍（图8C）。Western blot验证其蛋白水平增加（图8D）。CD52可抑制TLR介导的NF-κB活化并诱导凋亡，可能是CD5L调控炎症的新介质。
讨论
本研究证实内源性CD5L是维持人巨噬细胞基础炎症状态的关键因子。其缺失导致脂质组重塑、炎症通路抑制及抗炎分子CD52上调。尽管CD5L与RORα的遗传学关系支持二者功能关联，但直接调控机制仍需深入探索。此外，CD5L对单核细胞迁移相关分子（如MMP-2、MMP-9、NCAM-1）的调控提示其在动脉粥样硬化中的多效性作用。未来需在原代细胞模型（如BLaER1）中验证CD5L的功能，并区分其内源性分泌与外源性补充的效应。
