《Pathology - Research and Practice》：Indomethacin Alleviates Acute Pancreatitis by Restoring Autophagic Flux via the AMPK Signaling Pathway
编辑推荐：
急性胰腺炎（AP）治疗缺乏早期靶向药物，研究显示伊诺甲辛（IND）通过激活AMPK通路恢复自噬，减轻胰腺损伤。摘要：该研究建立动物和细胞模型，证实IND通过AMPK通路恢复自噬流，有效缓解胰腺炎相关炎症和细胞毒性，为AP治疗提供新策略。
刘丽军|李静|李燕|冯建明|余军|王泽宇|张超|陈丽宇|赵远航|聂永战|李彦|潘杨林
中国陕西省西安市第四军医大学西京消化病医院，国家消化系统疾病临床研究中心，胃肠肿瘤整体整合管理国家重点实验室消化内科
摘要
急性胰腺炎（AP）仍然是一个重大的临床挑战，目前缺乏早期、针对性的药物干预措施来阻止疾病进展。自噬功能障碍是AP的核心病理机制。虽然非甾体抗炎药吲哚美辛（IND）已被证明可以预防内镜逆行胰胆管造影（ERCP）后的胰腺炎，但其在其他类型AP中的更广泛治疗潜力及其潜在机制尚不清楚。新兴证据表明，IND可能具有激活自噬的作用。本研究旨在探讨IND是否通过调节自噬来预防AP。我们在体内和AR42J细胞中建立了Cerulein（CER）诱导的AP模型，以评估IND的保护作用。通过转录组学和通路分析来识别潜在的信号机制。结果表明，IND减轻了CER诱导的胰腺损伤，表现为组织病理学评分改善、血清淀粉酶和脂肪酶水平降低、炎症细胞浸润减少以及腺泡细胞毒性减弱。机制上，转录组和实验数据表明，IND通过激活AMP-激活蛋白激酶（AMPK）信号通路来恢复自噬。重要的是，IND的保护作用被自噬抑制剂氯喹或AMPK抑制剂Compound C（CC）所消除。总之，我们的发现表明IND可能成为治疗AP的有希望的候选药物。
引言
急性胰腺炎（AP）是一种常见的消化系统急症，由胰腺中胰蛋白酶原的异常激活引起。其特征是胰腺组织的自我消化、炎症、出血和坏死[1]、[2]。全球每年每10万人中有约34人发病，且发病率呈上升趋势[3]、[4]。尽管过去十年的死亡率有所下降，但AP仍然是一种严重的疾病，严重病例的死亡率从不到5%高达8%不等[5]、[6]。此外，AP常导致长期并发症，包括胰腺炎后糖尿病、胰腺外分泌功能障碍和复发性急性胰腺炎。大约8%的患者会发展为慢性胰腺炎，这是胰腺癌的已知风险因素[7]、[8]。这给患者和医疗系统带来了巨大负担[3]。然而，目前急性胰腺炎的临床管理主要依赖于支持性措施，如禁食、抗生素治疗和镇痛。这种方法缺乏早期、针对性的药物干预和有效策略来防止疾病进展[1]、[2]。因此，探索AP的发病机制并确定潜在的有效药物迫在眉睫。
巨自噬（以下简称自噬）是一种关键的细胞过程，有助于清除错误折叠的蛋白质和受损的细胞器[9]、[10]、[11]。胰腺由于蛋白质合成和分泌速率高，需要持续的自噬活动来维持细胞稳态[12]。胰腺腺泡细胞中自噬的失调是急性胰腺炎发病和进展的关键因素[13]、[14]。其特点是自噬体的积累和溶酶体降解功能受损，这会加剧胰蛋白酶原的激活、线粒体功能障碍以及炎症反应和细胞死亡[15]、[16]、[17]。重要的是，新兴证据表明，实验性恢复自噬流可以减轻或阻止AP的进展，从而使得自噬成为治疗AP的有希望的治疗靶点[18]、[19]、[20]、[21]。
吲哚美辛（IND）是一种常用的非甾体抗炎药（NSAID），已被证明在预防内镜逆行胰胆管造影（ERCP）后的胰腺炎方面具有临床疗效[22]、[23]、[24]。我们之前的研究还发现，术前使用IND可将胰腺炎的发生率降低约一半，并减少重症患者的比例[25]。作为一种广泛使用的NSAID，IND可能在管理除ERCP后胰腺炎之外的其他类型的急性胰腺炎方面具有更广泛的应用前景。此外，最近的研究表明，IND具有激活自噬和改善多种疾病的潜力[26]、[27]，这为预防AP提供了更有希望的可能性。然而，IND在预防其他类型胰腺炎中的作用尚不清楚，其对AP期间自噬过程调节的影响仍需进一步研究。
在这方面，本研究旨在探讨IND在AP中的治疗潜力及其潜在机制。我们证明，IND通过激活AMPK通路恢复自噬流来减轻胰腺损伤，表明IND是预防和治疗AP的有希望的候选药物。
实验部分
动物实验
从第四军医大学动物实验中心购买了C57BL/6小鼠（年龄8-10周；体重20-22克）。实验前一周，小鼠被饲养在SPF环境中，光照/黑暗周期为12小时，温度和湿度适宜，并提供自由食物和饮用水。
实验前小鼠禁食8-12小时。然后将其随机分为几组。CER组每小时接受50 μg/kg的CER（C9026）腹腔注射。
吲哚美辛减轻Cerulein诱导的小鼠急性胰腺炎
为了研究吲哚美辛（IND）在急性胰腺炎（AP）中的治疗潜力，我们通过腹腔注射Cerulein（CER）建立了小鼠模型（图1A）。正如预期的那样，CER诱导了AP的特征性病理变化，而这些变化通过IND治疗得到了显著缓解（8 mg/kg）。苏木精和伊红（H&E）染色显示，CER组出现了严重的胰腺水肿、大量的炎症细胞浸润和腺泡细胞空泡化。
讨论
在本研究中，我们证明了IND在体内和体外模型中都能保护小鼠免受CER诱导的AP。机制上，我们发现IND通过激活AMPK信号通路来恢复受损的自噬流，从而发挥保护作用。此外，通过CC抑制AMPK或通过CQ抑制自噬可以部分消除IND的保护作用。这些发现揭示了IND的新功能，并为其潜在作用提供了机制上的见解。
结论
总之，我们的研究表明，IND通过AMPK-自噬信号通路在体内和体外AP模型中都具有保护作用。IND是一种潜在的AP治疗药物。我们的研究为AP的治疗提供了早期药物干预的策略。
资助
本研究部分得到了中国国家重点研发计划（2022YFC2505100）和中国自然科学基金（81970557、82003152、82502834）的支持。
作者贡献声明
赵远航：数据分析。
陈丽宇：研究、数据管理。
张超：方法学。
王泽宇：软件操作。
余军：数据可视化、方法学。
冯建明：数据验证、方法学。
李燕：资源管理、研究、数据管理。
李静：数据可视化、方法学。
李彦：项目管理、监督。
刘丽军：初稿撰写、方法学、数据分析、数据管理。
潘杨林：修订与编辑、监督、资金筹集、格式整理。
利益冲突声明
作者声明没有利益冲突。论文的内容和撰写由作者本人负责。
