通过黑水虻介导的鸡粪生物转化来降低抗生素抗性基因和病原体的危害

《Science of The Total Environment》:Mitigation of antibiotic resistance genes and pathogens via black soldier fly-mediated bioconversion of chicken manure

【字体: 时间:2026年01月23日 来源:Science of The Total Environment 8

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  抗生素抗性基因及病原体在黑 soldier fly幼虫处理鸡粪中的动态变化研究。通过qPCR和16S rRNA测序分析,发现幼虫处理显著降低四环素类ARGs(tetA/tetB/tetG)和病原菌(Acinetobacter/Clostridium/Enterococcus/Escherichia-Shigella),但幼虫肠道中sul1/qnrB等ARGs富集。研究证实黑 soldier fly幼虫可作为可持续的禽类粪便生物转化技术,但需防范幼虫体内ARGs的二次释放风险。

  
吴云英|林圆玉
台湾国立大学动物科学技术系,台北市,台湾

摘要

抗生素在禽类生产中的广泛使用导致粪便中残留了抗生素抗性基因(ARGs)和多重耐药细菌,这对环境和公共卫生构成了严重威胁。黑水虻(Hermetia illucens)是一种新兴的生物转化剂,能够高效地将有机废物转化为富含营养的生物质。然而,它对禽类粪便回收过程中ARGs和病原菌命运的影响仍不甚明了。
本研究调查了黑水虻幼虫(BSFL)在转化鸡粪过程中微生物群落和ARGs的动态变化。通过qPCR技术量化了八种代表性的ARGs(sul1tetAtetBtetGblaTEMblaCTXblaSHVqnrB),并利用16S rRNA测序和PICRUSt分析细菌群落组成。BSFL处理显著降低了粪便中四环素抗性基因(tetAtetBtetG)以及AcinetobacterClostridiumEnterococcusEscherichia-Shigella等病原菌的相对丰度。相反,包括sul1qnrB和β-内酰胺酶相关基因在内的ARGs在幼虫肠道中积累,这可能是由于携带移动遗传元件的相关属(ProvidenciaEnterococcusDysgonomonas)的富集。
总体而言,BSFL生物转化有效减少了粪便中的ARGs和病原菌,有助于更安全的畜禽废物回收。然而,ARGs在幼虫肠道中的滞留突显了需要采取产后安全措施以防止其进一步扩散。这些发现有助于理解生物废物处理系统中ARGs的生态学特性,并支持制定符合“同一健康”框架的可持续粪便管理策略。

引言

全球对动物蛋白需求的增长推动了禽类产业的迅速扩张,产生了大量的禽类粪便(Hou等人,2017年)。在畜禽生产中,抗生素被广泛用作生长促进剂和预防感染的药物以提高生产力(Zhang等人,2022年)。然而,相当一部分抗生素未经代谢就被排出体外,导致粪便中积累抗生素残留物,并随后释放到环境中(Chen等人,2022年)。这些残留物促进了抗生素耐药细菌(ARB)的增殖,并促进了抗生素抗性基因(ARGs)的传播。这类ARGs可以在土壤和水生生态系统中持续存在,并可能通过畜禽废水进入河流和地表水,从而成为主要的环境储存库(Huang等人,2021年)。当动物粪便作为有机肥料使用时,ARGs会在农业土壤中进一步富集,引发了对生态系统完整性和公共健康潜在风险的担忧。
细菌主要通过移动遗传元件(MGEs)——如质粒、转座子和整合子——获得ARGs,这些元件使得细菌在复制过程中能够进行垂直传播,并在不同微生物类群之间进行水平基因转移(HGT)(De Smet等人,2018年)。此外,抗生素和重金属的环境残留物对携带ARGs的细菌具有选择压力,从而加速了多重耐药(MDR)菌株的出现和传播(Schiavone等人,2017年)。禽类粪便还携带多种人畜共患病原体,包括Salmonella属、Campylobacter jejuniListeria monocytogenes,这些病原体可以通过粪便渗漏和径流污染水和作物。这些病原体可以在地下水中长期存在,通过食物传播对环境安全和人类健康构成威胁。
将粪便作为有机肥料施用于土地是一种常见的农业做法,因为其富含养分且对土壤肥力有益。然而,粪便施肥也是将抗生素、ARGs和病原体引入农业土壤的主要途径。一些粪便处理方法(如堆肥和厌氧消化)可以部分减少抗生素残留物和ARGs,但其效果并不一致。在某些情况下,由于微生物演替和携带ARGs的菌群的增殖,特定ARGs的相对丰度在堆肥过程中甚至会增加(Wu等人,2021a)。此外,传统的处理方法(如堆肥和厌氧消化)通常需要外部添加剂、较长的处理时间以及大量的能源输入用于机械通风或温度控制,这会增加运营成本,并可能产生氨、一氧化二氮、甲烷泄漏和挥发性有机化合物等二次污染物。因此,开发可持续且生物效率高的策略来减少畜禽粪便中的ARGs和病原体对于提高畜牧业的环境可持续性至关重要(Cai等人,2018年)。
黑水虻(Hermetia illucens)是一种食腐昆虫,最近作为一种可持续且高效的有机废物生物转化剂受到了关注(Alagappan等人,2025年)。黑水虻幼虫(BSFL)可以将多种有机底物转化为高价值的生物质,这种生物质富含蛋白质和脂质,但重金属含量低,因此可以作为有价值的饲料成分或生物肥料。此外,BSFL生物转化降低了禽类粪便的干物质含量,同时减少了养分损失,磷和氮的排放分别减少了61-70%和30-50%,从而降低了富营养化的风险(Gold等人,2020年)。BSFL还可以从受污染的底物中吸收铜(Cu)、镉(Cd)、锌(Zn)和砷(As)等重金属,从而降低残留物中的重金属生物可利用性(Wu等人,2020年;Deng等人,2024年;Miranda等人,2021年)。与蚯蚓堆肥相比,基于BSFL的处理方法产生的温室气体和氨气较少,这突显了其在环境可持续废物管理方面的潜力(Ermolaev等人,2019年)。因此,BSFL介导的粪便处理不仅生产了增值产品,还增强了废物利用的循环性和经济可行性。
昆虫的肠道微生物群在宿主代谢、养分吸收和免疫防御中起着关键作用(Wu等人,2021b)。在BSFL中,肠道微生物群分泌多种酶,加速有机物的降解并提高养分利用率。重要的是,BSFL的活动即使在幼虫被移除后,也能通过抑制病原菌来净化有机废物。多项研究表明,BSFL处理后禽类粪便中的Escherichia coli O157:H7和Salmonella enterica Enteritidis等病原体的数量显著减少(Erickson等人,2004年)。然而,需要注意的是,某些微生物在幼虫肠道中的有限持久性反映了肠道微环境的差异,并不与粪便中观察到的整体病原体减少相矛盾。这种现象表明,粪便和幼虫肠道中的病原体命运受到底物条件和微生物相互作用的不同生态学动态的影响(Liu等人,2008年)。
除了抑制病原体外,BSFL生物转化还显著改变了底物的微生物群落组成。与病原体相关的类群(如ProteobacteriaBacteroidetes)趋于减少,而Firmicutes在BSFL处理后变得丰富,从而降低了病原体的流行率(Zhang等人,2022年)。有益的菌群(如Bacillus属)在幼虫肠道中通常会富集,有助于抑制病原体并参与抗生素和环境污染物(包括霉菌毒素和农药)的降解(Lalander等人,2015年;Zhang等人,2022年)。尽管有这些好处,BSFL对ARG动态的影响仍不甚明了。一些研究表明BSFL处理后粪便中的ARGs数量减少,而其他研究则观察到幼虫肠道中ARGs的积累,这可能是由于携带MGEs的肠道共生体的富集。这种双重现象强调了阐明BSFL介导的生物转化过程中ARG减少和潜在滞留机制的必要性。
在这项研究中,我们调查了BSFL在禽类粪便分解过程中对ARGs和病原菌的影响。具体来说,我们(1)使用定量PCR技术量化了粪便和幼虫肠道中的八种代表性ARGs(sul1tetAtetBtetGblaTEMblaCTXblaSHVqnrB);(2)通过平板计数法统计了E. coliEnterococcus属和乳酸菌的数量,以评估关键细菌群体的变化;(3)利用16S rRNA基因测序和PICRUSt分析来表征微生物群落组成并预测功能途径。本研究的结果旨在阐明BSFL减少禽类粪便中ARGs和病原体的能力,并为制定可持续和生物安全的粪便管理策略提供新的见解。

研究片段

昆虫幼虫和鸡粪的来源

黑水虻(BSF)卵购自Kunyi Biotechnology Co., Ltd. 卵被放置在悬挂在饲养基质上方的16目塑料筛网上。幼虫在标准饲料上饲养,该饲料由大豆残渣和小麦麸皮按10:3的比例混合而成。大豆残渣作为主要饲料层,小麦麸皮分布在周围以防止幼虫逃逸。卵在完全黑暗的环境中以27°C的温度孵化。5天后开始光照周期

底物和BSFL中ARGs的丰度

抗生素抗性基因(ARGs)的相对丰度(以每16S rRNA基因拷贝的ARG拷贝数表示)在BSFL和底物之间以及生物转化前后不同的饮食之间存在显著差异(图1)。sul1qnrB基因的相对丰度在CM和CMB组中随时间显著增加(p < 0.05)。经过12天的黑水虻处理后,鸡粪中tetAtetBtetG的相对丰度略有下降。

BSFL处理鸡粪过程中ARGs的变化

抗生素抗性基因(ARGs)可能来源于非病原性的环境细菌,并通过水平基因转移(HGT)在不同菌群之间传播(Zhao等人,2023年)。先前的研究表明ARG分布与微生物群落结构密切相关,动物和昆虫的肠道可能是ARG传播的潜在储存库和载体(Liu等人,2023年)。在本研究中,sul1qnrB在鸡粪(CM)中表现出增加趋势

结论

本研究表明,BSFL在鸡粪分解过程中有效减少了潜在病原体和几种ARGs的丰度。BSFL处理降低了AcinetobacterShigellaClostridiumEscherichia-Shigella的相对丰度,同时富集了促进蛋白质和多糖降解的腐生菌群,如DysgonomonasProteiniphilum。这些减少可能是由于幼虫肠道内的选择压力和

CRediT作者贡献声明

吴云英:撰写 – 审稿与编辑,撰写 – 原稿,可视化,方法学,研究,正式分析,数据管理。林圆玉:撰写 – 审稿与编辑,撰写 – 原稿,验证,监督,项目管理,资金获取,数据管理,概念化。

写作过程中生成式AI和AI辅助技术的声明

在准备这项工作时,作者使用了Chat GPT来改进某些句子。使用该工具后,作者根据需要对内容进行了审查和编辑,并对出版物的内容负全责。在数据分析或解释过程中没有使用任何AI工具。

资助

本研究的资金由台湾国家科学技术委员会(项目编号:114-2313-B-002 -044 -MY3);台湾农业部(项目编号:114AS-5.5.1-AD-02114AS-2.5.2-AP-01113AS-5.5.1-AD-02台湾国立大学(项目编号:G040164)提供。

利益冲突声明

作者声明他们没有已知的可能会影响本文所述工作的财务利益或个人关系。
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