《Frontiers in Immunology》：Non-human primate preclinical model revealed the feasibility and short-term safety of iPSC-derived innate-like T cells in autologous transplantation
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本研究通过建立非人灵长类自体移植模型，首次证实iPSC（诱导多能干细胞）分化的CD8αβ-CD3+先天样T细胞在体内具有良好安全性和独特肺泡归巢特性，为通用型T细胞免疫疗法（CAR-T）的临床转化提供了关键 preclinical（临床前）评估平台。
背景
T细胞免疫疗法在肿瘤治疗领域展现出巨大潜力，但传统异体T细胞疗法存在制备周期长、成本高及产品异质性等问题。诱导多能干细胞（iPSC）分化的T细胞（iPSC-T）因其可规模化扩增和基因编辑优势，成为通用型T细胞疗法的理想候选。然而，现有临床前评估主要依赖免疫缺陷小鼠模型，难以真实模拟人体免疫微环境及免疫相关不良反应。
方法
研究团队通过仙台病毒（SeV）载体将食蟹猴外周血T细胞重编程为iPSC，经C3H10T1/2基质细胞联合血管内皮生长因子（VEGF）和骨形态发生蛋白4（BMP4）诱导分化为造血祖细胞，再通过OP9-DLL1基质细胞促进T系分化。获得的iPSC-T细胞表现为CD8αβ-CD3+先天样表型，具有抗原依赖性与非依赖性双效细胞毒性。细胞经植物血凝素（PHA）反复刺激后仍保持强增殖能力，并通过逆转录病毒载体稳定表达绿色荧光蛋白（GFP）用于体内示踪。
结果
细胞表型分析显示iPSC-T高表达组织驻留标志CD103、CD69及衰竭标志PD-1，具备效应T细胞（CCR7-CD62L-）特征。体外细胞毒性实验证实其对K562细胞具有自然杀伤（NK）样杀伤活性，转导CD20嵌合抗原受体（CAR）后可特异性清除自体B细胞。动物实验中，三次自体输注总细胞量超8.4×107的iPSC-T细胞后，受体猴未出现体重异常、器官肿瘤生成或血液生化指标严重异常。细胞动力学显示GFP+细胞在输注后6小时达外周血峰值（约1%），7天内完全清除，但通过PCR及免疫组化在肺泡腔检测到细胞滞留。
讨论
该研究首次构建免疫健全的非人灵长类自体iPSC-T细胞评估模型，突破传统小鼠模型无法模拟细胞互作的局限。虽然细胞体内持久性较短，但其肺泡归巢特性为组织特异性免疫治疗提供新思路。结合猿猴免疫缺陷病毒（SIV）感染模型或B细胞清除模型，该平台有望加速iPSC来源CAR-T/TCR-T疗法在癌症及自身免疫疾病领域的临床转化。
方法学细节
研究遵循京都大学动物实验伦理委员会规范，使用10岁雌性（R496）和6岁雄性（R557）食蟹猴。iPSC通过碱性磷酸酶（AP）染色、NANOG免疫荧光及畸胎瘤三胚层分化实验验证多能性。T细胞分化采用低氧（5% O2）环境促进造血，流式细胞术检测CD34+CD45+祖细胞及CD3+CD4+CD8β+T前体。体内安全性监测涵盖体温、血常规、肝肾功能及组织病理学分析。
