联合使用申脉（Shenmai）和低温疗法对脑缺血-再灌注损伤的协同神经保护作用：通过ERK依赖性的抗炎机制实现

《Molecular Neurobiology》：Synergistic Neuroprotection of Combined Shenmai and Hypothermia in Cerebral Ischemia–Reperfusion Injury via ERK-Dependent Anti-inflammatory Effects

脑缺血再灌注损伤中动脉内低温联合参附可增强神经保护，通过ERK信号抑制炎症反应和微胶质激活。

　　

摘要

脑缺血-再灌注（I/R）损伤仍然是接受血管内血栓切除术（EVT）的缺血性中风患者面临的主要挑战。尽管选择性动脉内低温疗法显示出神经保护潜力，但其治疗效果有限，这凸显了需要有效的药物辅助治疗的重要性。本研究探讨了将颈内动脉低温疗法与申脉注射液（Shenmai）结合使用是否能够协同增强对脑I/R损伤的神经保护作用。将4°C的申脉注射液或生理盐水注入大鼠大脑中，通过体重、血清生化指标、器官形态学变化及相关参数来评估全身毒性。利用2,3,5-三苯基四氮唑氯化物（TTC）、苏木精-伊红（H&E）和Fluoro-Jade B（FJB）染色方法评估脑部毒性。通过阻断大脑中动脉（MCAO）诱导脑I/R损伤。通过TTC染色、神经功能缺陷评分、旋转棒测试、粘附物清除实验以及H&E染色、末端脱氧核苷酸转移酶dUTP切口末端标记（TUNEL）和Nissl染色等方法评估神经保护效果。通过RNA测序分析相关机制。采用定量实时聚合酶链反应（qRT-PCR）检测炎症细胞因子水平，通过Western blot和免疫荧光技术研究细胞外信号调节激酶（ERK）和核因子κB（NF-κB）的信号通路。ERK抑制剂PD98059用于验证这些机制的作用。结果显示，申脉注射液输注未引起全身或脑部毒性。与生理盐水相比，申脉注射液显著减少了梗死体积，改善了神经功能和行为表现，并减轻了神经元损伤。转录组分析显示促炎通路相关基因表达下调，微胶质细胞活化相关信号通路表达减弱。机制研究表明，申脉注射液增强了ERK1/2的磷酸化作用，进而降低了微胶质细胞标记物的表达并抑制了NF-κB P65的核转位。重要的是，这些保护作用在ERK1/2抑制剂PD98059的作用下显著减弱，表明ERK信号通路在介导申脉注射液的抗炎和神经保护效应中起关键作用。颈内动脉低温疗法与申脉注射液联合应用通过ERK介导的抗炎作用协同减轻脑I/R损伤，包括降低微胶质细胞活化标志物的表达。这些发现为申脉注射液作为动脉内低温疗法的有效药物辅助治疗提供了机制上的临床前证据，为急性缺血性中风患者EVT术后减轻再灌注损伤提供了有前景的治疗策略。