《Food & Function》：Proteins and lunasin from Glycine soja inhibited inflammation by activating the Hippo pathway through phosphorylation of YAP1 kinase
编辑推荐：
本研究首次系统揭示野大豆（Glycine soja）消化全粉（DWF）、总蛋白提取物（TPE）、无Lunasin蛋白（LFP）及富集Lunasin蛋白（ELPE）通过磷酸化Hippo通路核心激酶YAP1（Yes-associated protein 1）和LATS1/2（Large tumor suppressor kinase 1/2），促进YAP1胞质滞留，从而显著降低人单核细胞（THP-1）中促炎因子IL-6、IL-1β和MCP-1的表达。研究证实ELPE（纯度55.5%-72.5%）的炎症抑制效果最优，为开发靶向Hippo通路的植物源性功能食品提供新策略。
引言
Hippo通路作为细胞增殖、分化和器官发育的关键调控者，近年来因其在炎症和癌症中的重要作用成为研究热点。该通路的核心组分包括MST1/2（Macrophage stimulating 1/2）、LATS1/2、SAV1（Salvador-homolog 1）、MOB1（MPS one binder kinase activator 1）及YAP/TAZ（Transcriptional coactivator with PDZ-binding motif）。通路激活时，MST1/2与SAV1复合物磷酸化LATS1/2-MOB1，进而磷酸化YAP/TAZ，导致其滞留于胞质并被降解；反之，YAP/TAZ入核会启动促炎因子和癌基因转录。目前针对该通路的抑制剂多为合成化合物（如靶向YAP1的Verteporfin），植物源性多肽的研究尚属空白。野大豆（Glycine soja）作为栽培大豆（Glycine max）的祖先种，其富含的Lunasin肽已被报道具有抗炎活性，但其对Hippo通路的调控机制尚未明确。
材料与方法
研究选取4种高Lunasin含量的野大豆种质（PI407207等），通过离子交换色谱从脱脂豆粉中分离出TPE、LFP及ELPE。采用SDS-PAGE和LC-MS/MS验证Lunasin单体（5 kDa）和二聚体（10 kDa）的存在，ELISA定量显示ELPE中Lunasin浓度（51.6–86.9 mg g?1）显著高于TPE（16.2–32.9 mg g?1）。以THP-1巨噬细胞为模型，预刺激LPS（1 μg mL?1）后，分别给予DWF、TPE、LFP、ELPE（0.1–2.0 mg mL?1）处理，通过ELISA检测细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1水平，Western blot分析Hippo通路激酶表达，免疫荧光染色观察YAP1亚定位。
结果
- 1.
蛋白纯化与活性验证
ELPE中Lunasin纯度达56%-73%，其抑制IL-1β的IC50（0.016–0.038 mg mL?1）显著低于DWF（0.6–1.9 mg mL?1），表明纯化提升抗炎效能。
- 2.
促炎因子调控
TPE、LFP、ELPE均显著降低IL-6（74%–98%）、IL-1β及MCP-1（31%–99%）表达，其中TPE（种质PI424088）对四种细胞因子均具抑制效果。TNF-α水平未受显著影响。
- 3.
Hippo通路激活机制
- •
YAP1磷酸化：ELPE（PI407207）和TPE（PI424088）显著降低去磷酸化YAP1表达（p≤ 0.05），并增加其磷酸化形式（p-YAP1 Ser127）。
- •
LATS1/2磷酸化：DWF（PI407207等）可特异性增强p-LATS1/2（Ser909/872）水平。
- •
YAP1胞质滞留：免疫荧光显示ELPE（PI407207）处理组核质YAP1比值显著降低，证实磷酸化阻碍其核转位。
- •
MST1/2、MOB1、SAV1表达未受一致影响，提示野大豆成分特异性靶向YAP1/LATS1/2。
讨论
本研究首次揭示野大豆蛋白通过Hippo通路发挥抗炎作用：DWF可能作为LATS1/2特异性抑制剂，而ELPE/TPE则靶向YAP1磷酸化。相较于合成抑制剂（如Verteporfin），野大豆成分具有天然来源优势，且TPE中多种蛋白（如Bowman-Birk抑制剂、β-伴大豆球蛋白）可能协同增强抗炎效果。研究为开发靶向Hippo通路的植物基功能食品提供理论依据，并提示野生种质资源在精准营养中的潜力。
结论
野大豆蛋白及Lunasin可通过磷酸化YAP1/LATS1/2激活Hippo通路，抑制巨噬细胞炎症反应。ELPE与TPE在靶向YAP1方面展现突出潜力，有望作为功能性配料应用于炎症相关疾病的膳食干预策略。
