局限性硬皮病（LoS）是一种罕见的慢性自身免疫性疾病，其特征是皮肤和皮下组织的原发性纤维化（Kreuter, 2012）。流行病学研究表明，不同人群中LoS的发病率存在显著差异，大约为每10万人中有0.4至2.7例。该病以女性患者为主，男女比例约为2.6:1。LoS的发病年龄范围较广，不同亚型的发病高峰也有所不同。最常见的亚型——硬斑病通常发生在40至50岁的成人中，而线性硬皮病主要见于2至14岁的儿童和青少年（Fett和Werth, 2011）。
LoS的发病显著影响患者的生存率和生活质量。LoS的一个显著临床表现为受影响区域的皮肤增厚和紧绷，这不仅改变了患者的外貌，还限制了肢体活动，导致功能障碍和日常活动困难（Snarskaya和Vasileva, 2022）。疾病进展可能累及肺、心脏和肾脏等内脏器官，从而增加死亡风险和相关并发症（Papara等人, 2023）。此外，LoS的慢性性质和长期治疗的必要性给患者带来了巨大的心理压力，进一步降低了他们的生活质量。
LoS的发病机制复杂，涉及多个层面，包括免疫失衡、细胞因子网络失调、纤维化和组织重塑障碍。LoS的早期炎症阶段伴随着血管内皮损伤和黏附分子（如VCAM-1）的上调，这促进了免疫细胞的募集（Harjunp??等人, 2019）。这些免疫细胞分泌促纤维化细胞因子，包括白细胞介素-4（IL-4）、IL-6和转化生长因子-β（TGF-β），导致肌成纤维细胞激活和胶原蛋白过度沉积，最终导致皮肤硬化（Torok等人, 2019）。在分子水平上，TGF-β通过诱导基质金属蛋白酶-3和血小板衍生生长因子的产生来加剧纤维化过程，从而促进细胞外基质的合成（Badea等人, 2009）。
尽管传统治疗方法（如药物治疗和物理治疗）在缓解LoS症状方面显示出一定效果，但这些方法存在显著局限性。使用免疫抑制剂（如环磷酰胺）虽然可以有效减缓LoS的进展，但长期使用可能会增加感染和肝肾功能障碍的风险（Tehlirian等人, 2008）。此外，激光治疗等物理疗法可以在短期内改善LoS引起的关节活动度，但其在逆转皮肤纤维化方面的效果有限，导致患者依从性较低（Cassalia等人, 2024）。最近，自体脂肪移植在治疗LoS的皮下组织缺损方面显示出潜在的治疗效果，但仍存在脂肪存活率低和需要多次手术等挑战（Ma等人, 2025）。
肉毒杆菌神经毒素（BoNTs）是由肉毒梭菌及其近缘菌产生的具有神经毒性的蛋白质（Rossetto等人, 2014）。其中，肉毒杆菌神经毒素A型（BoNT/A1）是最有效的血清型，广泛应用于医疗和美容领域（Dressler, 2012）。研究表明，BoNT/A1作用于突触前神经元并抑制乙酰胆碱的释放，从而实现化学去神经化（Lim和Seet, 2010）。近年来，BoNT/A1对非神经细胞的影响越来越受到关注（Pinho-Ribeiro等人, 2018）。临床研究表明，BoNT/A1可以抑制皮肤成纤维细胞的生物活性。研究报道，BoNT/A1可以抑制病理性瘢痕中的纤维化（Li等人, 2021）。此外，BoNT/A1多年来一直用于治疗硬皮病患者的雷诺现象（Hughes和Herrick, 2016；Seyedmardani等人, 2022）。在研究人员发起的试验中，BoNT/A1已被用于治疗与局限性硬皮病相关的并发症（Danisi和Guidi, 2018；Kim等人, 2000；Mousty等人, 2011）。重要的是，重复注射BoNT/A1已被证明可以有效减少线性硬皮病患者的肌肉痉挛并改善运动障碍（Ca?as等人, 2012）。此外，BoNT/A1治疗还发现可以改善皮肤质量，包括减少皮肤萎缩和色素沉着（Rimoin和Arbiser, 2016）。然而，BoNT/A1在治疗LoS相关纤维化中的作用及其分子机制尚未得到系统研究。
在本研究中，我们检测了BoNT/A1在博莱霉素诱导的小鼠模型中对皮肤纤维化的疗效。然后我们使用RNA测序（RNA-Seq）来研究BoNT/A1对人类真皮成纤维细胞基因表达谱的影响。我们发现PI3K-Akt信号通路参与了BoNT/A1的抗纤维化作用。因此，我们的研究为基于BoNT/A1的LoS治疗提供了实验证据和可能的机制。
