西达本胺联合安罗替尼通过抑制Hippo通路协同治疗T细胞急性淋巴细胞白血病的作用与机制研究

《Biochemistry and Biophysics Reports》：Chidamide and Anlotinib act synergistically in Jurkat cells by inhibiting the Hippo signaling pathway

本研究针对T细胞急性淋巴细胞白血病（T-ALL）易耐药、易复发的临床难题，创新性地探索了组蛋白去乙酰化抑制剂（HDACi）西达本胺与多靶点酪氨酸激酶抑制剂（TKI）安罗替尼的联合治疗方案。研究发现，两药在Jurkat细胞中表现出显著协同抗白血病效应，其机制与协同抑制Hippo信号通路关键分子（如CCN2、YAP）、下调PI3K-Akt通路及重塑细胞外基质（ECM）相关基因表达密切相关。该研究为T-ALL的“表观遗传-激酶双重靶向”治疗策略提供了新的理论依据和实验支持。

　　

T细胞急性淋巴细胞白血病（T-ALL）是一种侵袭性强、预后差的血液恶性肿瘤，尤其在成人患者中复发率和移植相关死亡率居高不下。尽管化疗、靶向治疗及造血干细胞移植等手段不断进步，但耐药和复发仍是临床面临的严峻挑战。组蛋白去乙酰化抑制剂（HDACi）如西达本胺（Chidamide）虽在T-ALL中展现出表观遗传治疗潜力，但单药疗效有限且易引发代偿性耐药机制。为突破这一瓶颈，西南医科大学附属医院血液科马涛团队开展了一项创新性研究，探索西达本胺与多靶点酪氨酸激酶抑制剂安罗替尼（Anlotinib）的联合治疗方案，相关成果发表在《Biochemistry and Biophysics Reports》上。

为系统评估联合策略的可行性，研究人员以Jurkat细胞（人T-ALL细胞系）为模型，通过CCK-8法筛选出西达本胺与安罗替尼为最优协同组合。研究采用细胞增殖、凋亡、周期检测等表型分析，结合转录组测序（RNA-seq）和Western blotting等技术，深入探讨了联合用药的协同效应及分子机制。

关键技术方法概述

研究主要采用CCK-8法检测细胞活力并计算协同指数（CI）；流式细胞术分析细胞凋亡（Annexin V-FITC/PI双染）和周期分布（PI染色）；转录组测序（Illumina平台）进行差异基因表达和通路富集分析（GO、KEGG）；Western blotting验证Hippo通路关键蛋白表达。所有实验均重复三次，数据以均值±标准差表示，采用GraphPad Prism 9.5进行统计学分析。

3.1. 单药与联合药物的体外药效学评价

剂量和时间依赖性分析显示，西达本胺、安罗替尼、OTX015（BET抑制剂）和二甲双胍（Metformin）均能浓度依赖性地抑制Jurkat细胞活力，其中西达本胺与安罗替尼的IC₅₀较低且曲线斜率陡峭，提示作用高效。联合用药时，西达本胺（5 μM）与安罗替尼（1 μM）使细胞存活率显著降至30.37%，协同指数（CI）为0.30，表明具有协同效应；高浓度组合（50 μM + 50 μM）CI值降至0.02，呈现极强协同性，且剂量减少指数（DRI）显示安罗替尼剂量可降低超3000倍，凸显临床转化潜力。相比之下，含二甲双胍的三药或四药组合反而出现拮抗效应（CI >1），提示药物复杂性可能影响疗效。

3.2. 凋亡分析

流式细胞术结果显示，联合用药显著增强Jurkat细胞凋亡。低浓度组合（各0.25 μM）使总凋亡率升至22.87%，中浓度组合（各1 μM）达73.75%，显著高于单药组；高浓度组合（西达本胺5 μM + 安罗替尼2 μM）进一步诱导88.38%的细胞凋亡，证实协同增效作用。

3.3. 细胞周期分布分析

联合处理使G2/M期细胞比例升至18.81%（单药组<9%），表明协同诱导细胞周期阻滞。转录组数据同步显示细胞周期调控基因CCN2（log₂FC = -8.94）和TGFBI（log₂FC = -8.36）显著下调，提示ECM-细胞周期信号网络被破坏。

3.4. mRNA测序差异基因表达与通路分析

联合组共鉴定出336个差异表达基因（DEGs），包括胶原相关基因（COL1A1、COL4A1）和Hippo通路调控因子CCN2等。GO和KEGG富集分析表明，ECM组织、PI3K-Akt信号通路是核心富集项，提示联合治疗通过协同抑制ECM重塑和细胞内生存信号网络发挥抗白血病作用。

3.5. Hippo通路蛋白验证

Western blot结果证实，联合用药显著降低CCN2（下降60.24%）、磷酸化YAP（P-YAP，下降69.54%）和TAZ蛋白表达，与转录组数据一致，从蛋白水平验证了Hippo通路抑制。

结论与讨论

本研究首次揭示西达本胺与安罗替尼通过协同抑制Hippo通路（CCN2/YAP轴）、下调PI3K-Akt信号及重塑ECM，在T-ALL中发挥显著协同抗白血病效应。这种“表观遗传-激酶双重靶向”策略，有效克服了单药耐药，且高DRI值提示联合用药可大幅降低临床剂量、减少毒副作用。未来需在动物模型和临床前研究中进一步验证其安全性及疗效，并深入探索ECM重塑与代谢微环境的交互机制。该研究为T-ALL的联合治疗提供了新思路，具有重要的理论意义和转化价值。