《Communications Biology》：CISH, a key intracellular checkpoint, in comparison and combination to existing and emerging cancer immune checkpoints
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为破解PD-1/PD-L1耐药难题，团队首次系统比较CISH等7大胞内免疫检查点。CRISPR多基因编辑显示，CISHCD8T细胞在低抗原刺激下仍高分泌IFN-γ、TNF-α、IL-2，KRAS-TCR与CD19-CAR模型均证实其杀伤增强且不受PD-L1限制。临床NCT04426669已获持续完全缓解，为实体瘤与血液瘤通用型ACT提供新靶点。
肿瘤免疫治疗曾把“刹车”PD-1抗体推上神坛，却仍有30–60%患者因抗原丢失或PD-L1低表达而耐药。更棘手的是，像结直肠癌这类“冷”肿瘤，T细胞常因胞内“暗闸”CISH（cytokine-induced SH2 protein）被悄然沉默，连微量抗原都“看不见”。能否绕过膜表面检查点，直接松开T细胞体内的“手刹”，让它们在低抗原浓度下照样持续开火？
带着这一悬念，Intima Bioscience与明尼苏达大学、MSKCC组成联合团队，在《Communications Biology》发表重磅研究：他们用CRISPR/Cas9一口气“拔掉”CISH，再与PD-1、RASA2、SOCS1等6大新兴胞内靶点同台竞技，证明CISH缺失可让CD8T细胞在0.1μg/ml肽段、甚至CD19白血病面前依旧保持高敏杀伤，且临床首例CISHTIL治疗转移性结直肠癌已实现>2年完全缓解。
关键技术速览
健康供者PBMC来源CD8T细胞，CRISPR/Cas9 RNP电转多重敲除，TIDE/ICE验证编辑效率；AAV6介导KRAS-TCR定点敲入TRAC；Yescarta-like CD19-28z CAR逆转录病毒转导；xCELLigence实时阻抗杀伤与荧光素酶终点杀伤；Nomic nELISA 48因子分泌谱；低剂量αCD3（0.1–0.5μg/ml）模拟肿瘤低抗原。
结果解读
与PD-1不同，CISH失活增强T细胞效应和细胞毒功能不依赖肿瘤细胞表面配体
在缺乏PD-L1的αCD3刺激体系里，PDCD1敲除无优势，而CISH显著增加IFN-γ、TNF-α、IL-2多功细胞比例，并促进CD62L效应记忆表型。KRAS-TCRCD8细胞对H-1975的实时裂解曲线显示，CISH缺失组24h即达>80%裂解，PD-1KO仅约40%，且不受PD-L1/2表达水平影响。
CISH失活比其他新兴胞内免疫检查点更能增强T细胞功能
并行敲除RASA2、CBLB、SOCS1、REGNASE1、HPK1，只有CISH在0.5μg/ml αCD3下将IFN-γ细胞比例提升3倍，IL-2细胞提升5倍，并维持21d不衰竭；而RASA2或CBLB缺失甚至伴随PD-1上调。
CISH作为抗原特异性T细胞细胞毒的非冗余调节因子，其失活可与其他胞内免疫检查点协同
双敲实验显示，CISH+SOCS1或CISH+RASA2在低αCD3下呈相加效应，IFN-γ、TNF-α、IL-2同步升高；KRAS模型中，CISH+SOCS1联合24h裂解率提升至90%，优于单敲。
CISH失活增强CD19特异性CAR-T细胞对低抗原表达癌细胞的细胞毒力
在CD19（约1000分子）NALM6模型中，CISH CAR-T 18h裂解率仍>75%，对照<25%；分泌组发现促炎因子IFN-γ、GM-CSF、CCL4升高，免疫抑制因子Galectin-1/3、sCD137、IL-1α、EMMPRIN显著下调，提示CISH缺失同时“踩油门、拆路障”。
结论与讨论
研究首次把CISH推为“胞内PD-1”级明星靶点：其通过降解PLC-γ1负调TCR信号，作用独立于配体，可跨越PD-L1低表达、抗原逃逸、肿瘤类型三大障碍；单敲即可全面胜出，联合SOCS1或RASA2更上层楼；临床已见持续完全缓解，安全性良好。未来小分子或表观遗传策略调控CISH，有望让“冷”肿瘤变“热”，为实体瘤与血液瘤通用型细胞治疗铺平道路。
