《Microbiology Spectrum》：Outer membrane vesicles from Aeromonas veronii: biological properties and synergistic immunity enhancement with inactivated bacteria in crucian carp
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本研究系统探讨了维氏气单胞菌（Aeromonas veronii）TH0426菌株来源的外膜囊泡（OMVs）的生物学特性及其作为疫苗佐剂的潜力。通过蛋白组学分析发现OMVs富含OmpII、OmpA等保守抗原，动物实验表明OMVs单独或联合灭活菌苗（Av）可显著提升鲫鱼血清抗体效价、杀菌活性及免疫酶水平（P < 0.05），并上调肝脏、脾脏等组织中TGF-β、TNF-α等细胞因子表达。攻毒实验显示OMVs+Av组相对存活率高达66%，为水产养殖中细菌性病害防控提供了新策略。
外膜囊泡的提取与表征
研究采用超滤浓缩法从维氏气单胞菌TH0426菌株中提取OMVs，透射电镜显示其为直径10–300 nm的球形囊泡结构（图1B）。蛋白浓度测定为2.037 mg/mL，内毒素含量仅0.294 ng/mL（2.94 EU/mL），符合兽用疫苗安全标准。SDS-PAGE及质谱分析鉴定出76种蛋白质，其中外膜蛋白（OMPs）占比最高（32.9%），包括覆盖率达80%的外膜通道蛋白OmpII和44%的OmpA（图2）。
安全性评估
鲫鱼腹腔注射OMVs后14天内无死亡或组织病理学异常（图3），肝、脾、肾等器官H&E染色未见炎性损伤，证实OMVs具有良好的生物相容性。
免疫应答分析
血清抗体动态监测显示，OMVs+Av组在第14天效价达1:320，显著高于单独免疫组（P < 0.05）（表1）。血清杀菌活性在1:4稀释时，OMVs+Av组杀菌率为61.21%±5.21%，显著优于其他组（表2）。非特异性免疫酶（ACP、AKP、LZM等）及补体（C3、C4）、IgM水平在联合免疫组均显著提升（图4），表明OMVs可协同激活先天与适应性免疫。
免疫基因表达调控
RT-qPCR检测发现，OMVs+Av组在鲫鱼肝、脾、鳃等组织中TGF-β、TNF-α、IL-10、IL-1β基因表达显著上调（图5）。其中TGF-β在脾脏和鳃部持续高表达，而TNF-α与IL-1β的协同升高提示OMVs可能通过TLR通路激活炎症小体信号。
攻毒保护效果
攻毒实验显示，PBS组7天内全部死亡，而OMVs+Av组相对存活率达66%，显著高于单独OMVs组（47%）和Av组（61%）（图6），证明OMVs与灭活菌苗联用可有效增强宿主抗感染能力。
讨论与展望
本研究首次证实维氏气单胞菌OMVs可作为安全高效的疫苗佐剂，其多抗原负载特性与免疫刺激能力为水产疫苗研发提供了新思路。未来需优化OMVs规模化制备工艺以降低成本，并探索替代弗氏佐剂（CFA）的环保型免疫增强剂。
