利用基于对称哑铃型探针的超分支滚环扩增技术，实现对微小RNA（microRNA）的灵敏且选择性检测

《ANALYTICAL AND BIOANALYTICAL CHEMISTRY》：Sensitive and selective detection of microRNA using hyperbranched rolling circle amplification based on symmetric dumbbell-type probe

微RNA检测方法研究：开发结合对称哑铃型探针（SDTP）与足迹引发的超分支滚环扩增（HRCA）技术，实现低丰度、高同源性miRNA的高灵敏度（检测限214 amol/L）和特异性检测，适用于血清及细胞裂解液样本分析，无需RNA提取。

　　

摘要

研究体内微小RNA（microRNA, miRNA）表达的变化有助于深入理解它们与肿瘤的关联功能，并基于其作为疾病标志物的作用来开展临床检测。然而，由于miRNA的丰度较低且同源性较高，其检测仍然具有挑战性。在此，我们结合了一种对称哑铃型探针（SDTP）和趾架引发的超分支滚环扩增（HRCA）技术，开发出一种指数级扩增方法，以实现高灵敏度和选择性。哑铃型探针的趾架区域能够特异性结合目标分子，从而触发趾架介导的链置换反应，使SDTP转化为环状结构。在phi29 DNA聚合酶、引物P2和dNTP的存在下，HRCA反应以环状结构为模板持续进行，进而实现let-7a的指数级扩增。当let-7a的浓度在1.00 fmol·L^?1到1.00 nmol·L^?1范围内时，该方法测得的荧光强度与let-7a浓度的对数（单位：pmol·L^?1）呈线性相关，检测限为214 amol·L^?1

图形摘要

研究体内微小RNA表达的变化有助于深入理解它们与肿瘤的关联功能，并基于其作为疾病标志物的作用来开展临床检测。然而，由于miRNA的丰度较低且同源性较高，其检测仍然具有挑战性。在此，我们结合了一种对称哑铃型探针（SDTP）和趾架引发的超分支滚环扩增（HRCA）技术，开发出一种指数级扩增方法，以实现高灵敏度和选择性。哑铃型探针的趾架区域能够特异性结合目标分子，从而触发趾架介导的链置换反应，使SDTP转化为环状结构。在phi29 DNA聚合酶、引物P2和dNTP的存在下，HRCA反应以环状结构为模板持续进行，进而实现let-7a的指数级扩增。当let-7a的浓度在1.00 fmol·L^?1到1.00 nmol·L^?1范围内时，该方法测得的荧光强度与let-7a浓度的对数（单位：pmol·L^?1）呈线性相关，检测限为214 amol·L^?1

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