通过LC-MS/MS方法测定土耳其市售大麻籽及大麻籽油产品中的大麻素含量

《Forensic Science International》：Determination of Cannabinoids in Commercial Hemp Seeds and Hemp Seed Oil Products in Türkiye by LC-MS/MS

工业大麻种子及油中多种大麻素含量分析显示，土耳其市售种子油Δ9-THC平均达6.64μg/mL，普遍超标欧盟（7.5μg/g）及美国（10μg/g）法规，存在法律风险。

　　

Cagdas Ufuk KACARGIL|Hatice SOYTURK|Asl? ATASOY AYDIN|?smail Ethem GOREN|G?ksun DEMIREL|Nebile DAGLIOGLU

土耳其安卡拉宪兵部队法医部门

摘要

大麻籽和大麻籽油既被用作化妆品，也被用作膳食补充剂。许多国家已经制定了法律规范，对大麻籽和大麻籽油中的大麻素（尤其是Δ9-四氢大麻酚（Δ9-THC）的含量设定了阈值。本研究开发并验证了一种液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）方法，用于定量测定12种大麻籽和20种大麻籽油中的Δ9-四氢大麻酚（Δ9-THC）、Δ8-四氢大麻酚（Δ8-THC）、大麻二酚（CBD）、大麻酚（CBN）和四氢大麻酸（THCA）的含量。使用该优化方法测定，大麻籽中的Δ9-THC浓度范围为0.11至2.08 μg/g（平均值0.78 μg/g，标准差SD：0.66 μg/g，标准误差SE：0.19 μg/g），Δ8-THC浓度范围为0.07至0.20 μg/g（平均值0.12 μg/g，标准差SD：0.05 μg/g，标准误差SE：0.01 μg/g），CBD浓度范围为0.13至2.40 μg/g（平均值0.88 μg/g，标准差SD：0.76 μg/g，标准误差SE：0.22 μg/g），CBN浓度范围为0.05至0.21 μg/g（平均值0.12 μg/g，标准差SD：0.05 μg/g，标准误差SE：0.11 μg/g），THCA浓度范围为0.01至1.18 μg/g（平均值0.60 μg/g，标准差SD：0.59 μg/g，标准误差SE：0.34 μg/g）。大麻籽油中的Δ9-THC浓度范围为0.11至31.08 μg/mL（平均值6.64 μg/mL，标准差SD：8.55 μg/mL，标准误差SE：1.96 μg/mL），Δ8-THC浓度范围为0.03至15.17 μg/mL（平均值3.57 μg/mL，标准差SD：3.94 μg/mL，标准误差SE：0.90 μg/mL），CBD浓度范围为0.11至24.34 μg/mL（平均值5.15 μg/mL，标准差SD：6.24 μg/mL，标准误差SE：1.43 μg/mL），CBN浓度范围为0.02至3.81 μg/mL（平均值0.94 μg/mL，标准差SD：1.04 μg/mL，标准误差SE：0.25 μg/mL），THCA浓度范围为0.08至5.57 μg/mL（平均值1.73 μg/mL，标准差SD：2.25 μg/mL，标准误差SE：0.71 μg/mL）。除了一种大麻籽油样本外，所有从市场上获得的大麻籽和籽油样本均含有可检测量的∑THC。土耳其市售大麻籽油中的∑THC平均水平（10.21 μg/mL）高于丹麦（4 μg/mL）和欧盟（7.5 μg/g）的法规阈值，以及美国（10 μg/g）、加拿大、新西兰和韩国（10 μg/mL）设定的限制。由于土耳其现行法律对Δ9-THC实行“零容忍”原则，本研究的结果表明，大麻素含量可能会引发法律问题。

引言

Cannabis sativa L.由于大麻素（主要是Δ9-THC）的致幻作用，其在全球范围内受到严格的法律法规监管[1]。与花序部分不同，大麻植物的根、茎和种子通常含有微量的Δ9-四氢大麻酚（Δ9-THC），而Δ9-THC具有主要的致幻效果[1]、[2]。大麻中的主要植物大麻素化合物是Δ9-THC、大麻二酚（CBD）和大麻酚（CBN）。Δ8-THC在大多数大麻植物中天然存在，但含量较低[3]、[4]。Δ8-THC是Δ9-THC的位置异构体。尽管它们具有相同的三环二苯并吡喃结构，但Δ8-THC中的双键位于C8和C9之间，而Δ9-THC中的双键位于C9和C10之间。虽然Δ8-THC的致幻效果与Δ9-THC相似，但其效力显著较低[5]。根据2023年联合国毒品和犯罪问题办公室（UNODC）的世界毒品报告，初步数据显示Δ8-THC在市场上的供应量正在迅速增加；在美国部分地区和西欧，Δ8-THC越来越受欢迎[6]。关于如何方便地获取Δ8-THC的方法已在开源网站上进行了描述性发布[7]。

历史上，由于大麻籽富含必需脂肪酸和不饱和脂肪酸，它们被用作食物来源[8]、[9]、[10]。除了营养价值外，从大麻植物及其种子中提取的油也被广泛用于化妆品[11]。籽油中的独特欧米伽成分比例和γ-亚麻酸有助于皮肤吸收轻质身体油和面霜等化妆品，是这些产品的重要组成部分[8]。大麻提取物可用于肥皂、洗发水、沐浴露、染发剂、乳液、面霜和许多其他化妆品中。一些研究表明，大麻有助于促进头发生长并防止干燥和断裂[11]。

大麻素通常以杂质的形式存在于大麻籽油中。油中的大麻素含量因生产和清洁工艺而异。世界各国对大麻籽和大麻籽油中的Δ9-THC设定了不同的阈值，以控制其含量（表1）[12]、[13]、[14]、[15]、[16]、[17]、[18]。

土耳其关于精神活性物质的法规并不禁止大麻籽及其压榨所得的油。因此，大麻籽和籽油可以从销售草本产品的商家处购买。然而，由于大麻籽与叶子接触，在生产这些油的过程中没有进行足够细致的清洗，叶子中的Δ9-THC可能会污染籽粒，而受污染的Δ9-THC和Δ8-THC会在压榨过程中渗入籽油中[19]。

如今，大麻籽可以直接作为最终食品产品提供给消费者。使用这种籽粒生产的常见最终产品包括纯素肉、牛奶、酸奶、冰淇淋、面粉、零食棒、巧克力和酒精饮料[20]。

也有研究表明，当大麻籽油被作为食物摄入时，可以在生物样本中检测到大麻素[21]、[22]。

CBD是大麻的主要成分，在强酸性条件下可以转化为Δ9-THC及其多种异构体（Δ7-THC、Δ8-THC、Δ10-THC、exo-THC和iso-THC）[23]、[24]。由于美国《农业改进法》（AIA）并不将Δ8-THC视为非法物质，因此从大麻二酚（CBD）合成Δ8-THC的商业兴趣显著增加[24]。根据联合国毒品和犯罪问题办公室（UNODC）的报道，Δ8-THC已经导致需要医疗干预的不良后果[6]。最近的研究提到了分析上区分Δ8-THC和Δ9-THC的难度。

近年来，大麻籽的利用成为全球研究的焦点，导致研究其用途、特性和安全性的研究显著增加[25]。本研究的目的是通过液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）验证一种分析方法，用于测定土耳其市售大麻籽和芳香油中Δ9-THC、Δ8-THC、CBD、CBN和THCA的含量。根据获得的结果，将土耳其实施的法规与市场实际情况进行了对比。

方法片段

试剂和标准品

Δ9-THC、CBD和CBN的认证参考物质（CRMs）从Lipomed?（瑞士）购买。THCA从Cayman?（密歇根州安阿伯）购买。Δ8-THC和作为内标（IS）的Δ9-THC-COOH-d3从Chiron?（加利福尼亚州埃默里维尔）购买。乙醇（EtOH）、甲醇（MeOH）、异丙醇（IPA）、三氯甲烷（TCM）、1-氯丁烷（1CB）、二氯甲烷（DCM）、乙酸乙酯、乙酸铵、乙腈（ACN）、正己烷、HCl（37%）和超纯水

方法验证

方法验证遵循ANSI/ASB标准036（法医毒理学方法验证标准实践）[27]制定的指南进行，包括校准曲线、特异性、选择性、检测限（LOD）、定量限（LOQ）、精度、准确性、基质效应、过程效率和回收率参数。为每种物质建立了校准曲线。对于籽样，Δ9-THC、Δ8-THC、CBD、CBN和THCA的校准范围确定为10

讨论

大麻籽及其衍生油具有广泛的应用范围，从化妆品和食品到工业和医药用途。它们可以直接作为食物食用，同时也作为众多终端产品的原材料。然而，如果未进行必要的清洗步骤，这些籽粒中可能会检测到被禁止的大麻素（如Δ9-THC和Δ8-THC）。此外，食用这些受污染的产品也可能导致大麻素的检测

结论

本研究成功验证了一种灵敏且稳健的LC-MS/MS方法，该方法采用液-液萃取（LLE）技术，可同时测定大麻籽和籽油中的Δ9-THC、Δ8-THC、CBD、CBN和THCA。该方法表现出高回收率、精度和线性，证明了其在法医应用中的适用性。据我们所知，这是首次全面研究土耳其市售大麻籽产品中的大麻素含量的研究

资助

本研究基于Cagdas Ufuk Kacarg?l的博士论文，由Cukurova大学科学研究项目组资助（项目编号：TDK-2022-14487）。

作者贡献声明

?smail Ethem GOREN：撰写 – 审稿与编辑、软件、方法学、调查、数据管理。DEMIREL Goksun：资源获取、项目管理、资金筹集。Daglioglu Nebile：撰写 – 审稿与编辑、初稿撰写、监督、资源管理、概念构思。Cagdas Ufuk KACARGIL：撰写 – 审稿与编辑、初稿撰写、方法验证、方法学、调查、数据分析、概念构思。Hatice SOYTURK：方法学、调查

利益冲突声明

作者声明他们没有可能影响本文工作的财务利益或个人关系。