七带石斑鱼（Hyporthodus septemfasciatus）中串联重复半乳凝集素-9基因的分子特征及其体外细菌聚集特性

《Aquaculture International》：Molecular characterization and in vitro bacterial aggregating properties of tandem-repeat galectin-9 gene from sevenband grouper (Hyporthodus septemfasciatus)

本研究克隆了七带宽体鱼 galectin-9 基因，解析其 cDNA 序列（2005 bp）及蛋白结构，证实重组蛋白（rSGGal-9）具有细菌聚集活性，为水产病害防治提供理论依据。

　　

摘要

石斑鱼是全球最有价值的水产养殖鱼类之一。然而，它们对各种病原体的易感性导致了相当大的经济损失。在七带石斑鱼（Hyporthodus septemfasciatus）的转录组中发现了半乳凝集素-9（galectin-9）基因。该基因被克隆出来，其重组蛋白被过表达，从而能够对其分子特性进行详细分析。完整的cDNA序列包含2,005个碱基对（bp），其中包括162 bp的5′非翻译区（UTR）、829 bp的3′非翻译区（3′-UTR）以及1,014 bp的开放阅读框（ORF），编码338个氨基酸（aa）。SGGal-9具有两个保守的碳水化合物识别结构域（CRDs）：一个N端CRD包含135个氨基酸，一个C端CRD包含123个氨基酸。SGGal-9中的每个CRD都包含两个保守的β-半乳糖苷结合基序（H_NPR和WG_EER）。预测的蛋白质结构中没有信号肽或跨膜结构域。将SGGal-9基因亚克隆到pCold I载体后，重组SGGal-9（rSGGal-9）在大肠杆菌（E. coli） BL21（DE3）中成功过表达为可溶性蛋白，并通过0.1 mM异丙基-β-D-1-硫代半乳吡喃糖（IPTG）进行诱导。为了评估rSGGal-9的活性，使用橄榄比目鱼（Paralichthys olivaceus）和七带石斑鱼的红细胞进行了血凝试验，结果显示在最低浓度3.125 μg/mL和12.5 μg/mL时即可有效聚集。此外，还在其他细菌中证实了rSGGal-9的聚集能力，包括大肠杆菌、Lactococcus garvieae、Photobacterium damselae、Streptococcus iniae、Streptococcus parauberis和Vibrio parahaemolyticus。这些仅基于体外实验的结果表明，半乳凝集素-9具有细菌聚集特性；然而，需要进一步的体内研究来评估其在水产养殖中的预防潜力。