《Cytopathology》：Finding More in Less: Precision Medicine for Pancreatic Cancer Using Residual Cytology Samples
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本文深入探讨了利用胰腺导管腺癌（PDAC）诊断后残留的液基细胞学（LBC）样本进行分子分析（如下一代测序NGS和微卫星不稳定性MSI检测）的可行性与临床价值。研究证实，即使室温储存长达8个月，残余LBC样本的核酸质量仍能支持高精度分子检测，其DNA分析有效性高达97.6%，且在某些患者中是唯一可用样本。该发现为晚期PDAC患者，尤其是无法手术或缺乏组织块（Cell Block）的患者，提供了获取靶向治疗机会的关键技术保障，强调了常规长期保存恶性细胞学样本的重要性。
引言
胰腺导管腺癌（PDAC）是恶性程度最高的肿瘤之一，发病率呈上升趋势。其确诊需要病理学确认，而内镜超声引导下细针穿刺抽吸（EUS-FNA）是获取细胞学样本的主要技术。液基细胞学（LBC）处理被广泛应用，并可用于制作石蜡细胞块。然而，PDAC的肿瘤细胞得率通常较低。分子分析揭示了PDAC中存在一系列潜在的可靶向变异，例如针对KRAS-G12C的sotorasib或adagrasib，以及针对p.G12D的MTRX1133等KRAS抑制剂展现了前景。虽然微卫星不稳定性（MSI）在PDAC中罕见，但免疫检查点抑制剂治疗对部分患者可能是一种选择。当前指南建议在病理诊断完成后保存残余LBC样本，但对于恶性肿瘤样本的长期储存价值及其在延迟分子检测中的实用性仍不明确。本研究旨在回顾性评估长期储存的残余LBC样本用于NGS和MSI RT-PCR检测的质量和结果。
方法
本研究回顾性分析了2020年1月至2024年6月期间在Hospital Clínico Universitario de Valencia经EUS-FNA和LBC诊断为PDAC的268例患者的数据。排除了切除标本和转移至胰腺的肿瘤。研究重点分析了54例因临床需要而进行分子诊断（NGS和/或MSI）的患者样本。样本选择（残余LBC或细胞块）由经验丰富的病理学家根据样本可用性和质量（如肿瘤细胞百分比、坏死情况）决定。DNA和RNA提取使用Qiagen试剂盒或Genexus FFPE DNA and RNA Purification Kit，并通过荧光定量法进行质量控制。NGS采用Thermo Fisher Scientific的多种靶向panel（如Oncomine Focus Assay, Oncomine Comprehensive Assay v3），检测体细胞变异、拷贝数变异（CNV）和基因融合。MSI检测使用Idylla MSI RT-PCR assay。使用曼-惠特尼U检验、线性回归和Fisher精确检验进行统计分析。
结果
残余LBC样本是部分患者分子诊断的唯一选择
在268例患者中，有54例（20.15%）应肿瘤医生要求进行了分子分析。其中，8例患者（14.8%）仅有残余LBC样本可用。31.7%的分子分析请求发生在PDAC诊断2个月后，最长达27个月后。这凸显了长期保存恶性LBC样本的必要性。
长期储存的残余LBC适用于DNA提取和分子诊断
DNA浓度在LBC样本中显著高于细胞块样本（p = 0.0065），且储存时间（最长239天）对DNA浓度无显著影响。LBC样本的中位数绝对配对差异（MAPD）低于细胞块（p = 0.0187），表明数据噪音更小、质量更高。NGS DNA分析在LBC样本中的有效率为97.62%（30/31），与细胞块（100%, 11/11）无显著差异。MSI RT-PCR检测在LBC样本中的无效率也较低（1/23）。RNA分析的有效率（LBC: 77.4%; 细胞块: 63.6%）低于DNA，但两种样本类型间无显著差异。
胰腺导管腺癌中检测到的分子改变
在41例具有有效NGS DNA结果的PDAC患者中，85.4%（35例）检测到基因组突变。最常见的突变基因是KRAS（35/41）和TP53（12/41）。其他检测到的突变包括CDKN2A（3例）、RNF43（3例），以及ATM、GNAS、SMAD4、STK11、SMARCA4和ERBB2（各1例）。KRAS突变亚型以G12V和G12D最常见（各13例），其次是G12R（5例）、G12H（3例）和G12C（1例）。此外，在7例患者中检测到CNV，涉及基因如FGFR1、CCND1、MYC等。未检测到基因融合。所有检测的PDAC病例均未发现MSI，但在一例胰腺转移性胃腺癌的残余LBC样本中成功检测到MSI，验证了该技术的适用性。
讨论
本研究证实，在真实临床环境中，来自PDAC的残余LBC样本即使经过数月的室温储存，仍能有效用于NGS和RT-PCR分子分析。对于超过14%缺乏细胞块的患者，残余LBC是其获取个性化治疗的唯一样本来源。尽管RNA分析的稳定性相对较低，但DNA质量参数（如DNA浓度、MAPD、平均扩增子长度、靶向读取百分比）均表现良好，支持测序成功。检测到的分子改变谱（KRAS、TP53等）与既往研究一致。随着KRAS抑制剂等靶向药物的发展，PDAC精准医疗变得日益可行。因此，常规长期保存诊断为恶性的残余LBC样本，对于确保患者在病理诊断后仍能进行分子检测并获取潜在靶向治疗至关重要。建议在条件允许时优先将样本储存于4°C以更好地保持核酸完整性。未来的前瞻性研究有望进一步验证这些发现。
