《Forensic Science International》：Development and validation of bone extraction procedure in forensic toxicology: a comparison of different extraction techniques
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法医毒理学中通过比较四种骨组织提取方法（EM-1至EM-4），结合液相色谱-串联质谱法验证，确定EM-1方法在绝对回收率、精密度和抗干扰性方面最优，并成功应用于十例真实案件检测，涵盖阿片类、镇静剂等八大类毒物。
Gaia Giordano | Michele Boracchi | Giuseppe D’Orazio (MChem) | Cristina Cattaneo | Domenico Di Candia (MChem)
意大利米兰大学生物医学科学系
摘要
目的
法医毒理学在法医学中起着至关重要的作用，主要致力于检测和解读各种生物样本（包括骨组织）中的外源物质。本研究旨在比较不同的骨组织提取方法，并通过液相色谱-串联质谱法分析和验证最佳的分析方法。
方法
样本来自尸检尸体，经过处理后采用四种不同的提取方法（EM-1至EM-4）进行提取。
结果
绝对回收率测试表明，EM-1是更有效的提取方法，能够成功检测到所有目标分析物。对EM-1的方法验证显示其偏差、精度、干扰性和稳定性均符合要求。随后将该方法应用于十个实际案例，证实了其在法医毒理学中检测骨组织中的阿片类药物、分离麻醉剂、兴奋剂、苯二氮卓类药物、抗惊厥药、抗抑郁药和镇静剂的效能。
结论
本研究验证了一种新的骨组织提取方法，并将其应用于实际法医案例中。
引言
法医毒理学是毒理学的一个分支，涉及在具有司法意义的医学法律背景下对外源物质的定性和定量检测。毒理学分析可以在传统和非传统的生物基质上进行，其中骨组织是最具挑战性的基质之一。
在法医毒理学中，采用了多种提取程序[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15], [16], [17], [18], [19], [20], [21], [22]，并结合了多种仪器技术[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15], [16], [17], [18], [19], [20], [21], [22]。
然而，目前文献中尚未就骨组织毒理学应采用哪种提取方法和分析仪器达成共识（无论是湿骨还是干骨）。因此，本研究的目的是比较不同的提取技术，并通过液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）从定性和定量角度验证最有效的方法。
仪器介绍
所用仪器
样品使用Thermo Scientific? TSQ Fortis? II三重四极杆质谱仪进行分析。该质谱仪与HPLC系统相连，HPLC系统包括Surveyor MS四元泵、脱气装置、Surveyor AS自动进样器、带有Rheodyne阀门的加热电喷雾离子化源（HESI）。色谱柱为反相Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18 4.6×50 mm，颗粒大小为1.8 μm。
绝对回收率测试（EM-1、EM-2、EM-3、EM-4）
根据国际指南[28]，对每种分析物进行了绝对回收率测试，以比较新的提取方法。所有预处理的骨样本均采用上述四种方法进行提取。绝对回收率的结果总结在表2中。
数据显示，EM-1方法成功提取了所有目标分析物。
讨论
法医毒理学是毒理学的一个专门领域，与法医学密切相关。它涉及为医学法律目的对外源物质进行定性和定量检测，尤其是在检测结果具有法律意义时。毒理学分析可以在多种生物基质上进行，其中骨组织是最复杂和最具挑战性的基质之一。
本研究比较了多种骨组织提取方法，最终确定EM-1方法为最有效的方法。EM-1方法在绝对回收率测试中表现出色，所有测试分析物的回收率均较高。此外，EM-1的验证过程符合所有既定的验收标准，证明了其高效性。
为了评估EM-1方法的实际应用性，将其应用于实际案例中。
伦理批准
本研究使用人类尸体进行。本文未包含任何作者参与的（活体）人类参与者或动物实验。数据收集符合意大利警察殡仪馆规定。
资金支持
本研究未获得任何公共机构、商业机构或非营利组织的资助。
作者贡献声明
Gaia Giordano：撰写、审稿与编辑、原始稿撰写、数据整理。
Cristina Cattaneo：指导。
Domenico Di Candia：项目管理、方法设计、概念构思。
Michele Boracchi：数据分析。
Giuseppe D’Orazio：数据分析。
