鸡FAdV-4劫持宿主eIF3m通过C端互作正调控病毒复制的机制研究

《Poultry Science》：Poultry Proteus mirabilis in Selected Areas of Hunan, China: Resistance Profiles and Virulence Genes

本研究针对高致病性禽腺病毒血清4型（FAdV-4）感染机制不明确的难题，通过Co-IP/MS技术筛选到与病毒非结构蛋白ORF1B互作的宿主因子eIF3m，证实其C端结构域介导二者结合，并发现过表达eIF3m可显著促进FAdV-4在LMH细胞中的复制，而敲低eIF3m则抑制病毒增殖。该研究首次揭示eIF3m作为FAdV-4复制关键宿主因子，为抗病毒靶点开发提供新思路。

　　

近年来，禽类肝炎-心包积水综合征（HHS）给全球家禽养殖业带来严重经济损失，其元凶——高致病性禽腺病毒血清4型（FAdV-4）自2015年起在中国广泛流行，感染3至6周龄雏鸡后死亡率高达80%。更令人担忧的是，该病毒的宿主范围持续扩大，鸭、鸽、孔雀等禽类均出现感染病例。然而，FAdV-4如何劫持宿主细胞机制完成自身复制的关键环节仍不明确。

此前研究发现，FAdV-4特有的非结构蛋白ORF1B能够拮抗I型干扰素产生，但其具体作用机制尚未阐明。为揭示ORF1B在病毒生命周期中的功能，河南农业大学研究团队在《Poultry Science》发表论文，通过多技术联用首次发现真核翻译起始因子eIF3m是ORF1B的关键宿主互作蛋白，并证实该互作对病毒复制具有正向调控作用。

研究团队主要采用四种关键技术：

1. 1.
   免疫共沉淀结合质谱分析（Co-IP/MS）筛选ORF1B互作宿主蛋白；
2. 2.
   基因过表达与RNA干扰技术调控eIF3m表达水平；
3. 3.
   免疫共沉淀（Co-IP）和激光共聚焦显微镜验证蛋白互作与亚细胞共定位；
4. 4.
   病毒滴度测定（TCID₅₀）和qRT-PCR量化病毒复制效率。

ORF1B-宿主蛋白互作组的鉴定

通过Co-IP/MS技术从LMH细胞中鉴定出2502个与ORF1B潜在互作的宿主蛋白。GO和KEGG富集分析显示这些蛋白显著富集于三羧酸循环、内质网膜等代谢通路，提示ORF1B可能通过重编程宿主细胞代谢环境调控病毒复制。

eIF3m与ORF1B互作验证

Co-IP实验证实eIF3m与ORF1B在细胞内特异性结合，且在病毒感染条件下仍能捕获内源性ORF1B。激光共聚焦显微镜显示EGFP-ORF1B与DsRed-eIF3m在细胞质中共定位，直观呈现二者相互作用。

eIF3m C端介导互作

通过构建eIF3m截短体发现，其C端（180-374氨基酸）PCI结构域是结合ORF1B的关键区域，而N端（1-179氨基酸）无相互作用，提示病毒靶向eIF3m的核心功能域实现劫持。

eIF3m促进病毒复制

功能实验表明，过表达eIF3m使FAdV-4滴度在48小时达到8.56 Log₁₀TCID₅₀/100 μL，较对照组提高10倍；相反，敲低eIF3m后病毒ORF1B蛋白表达显著下降，病毒滴度降低至6.72 Log₁₀TCID₅₀/100 μL，证实eIF3m对病毒复制的正向调控作用。

本研究首次揭示FAdV-4通过ORF1B劫持翻译起始因子eIF3m的分子机制，阐明病毒利用宿主蛋白合成机器促进自身复制的策略。eIF3m作为eIF3复合物的核心亚基，其PCI结构域在翻译起始中发挥关键作用，该发现为理解病毒与宿主互作提供了新视角，也为开发靶向eIF3m的抗FAdV-4药物奠定了理论基础。