《Journal of Virology》：HEV replication is promoted by blocking the NF-κB signaling pathway through inhibiting FLNa expression
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本研究揭示了HEV感染通过其解旋酶（Hel）与宿主细胞骨架蛋白细丝蛋白A（FLNa）相互作用，显著抑制FLNa表达。FLNa的缺失阻断了IκBα的降解，从而抑制NF-κB的核转位，使病毒得以逃逸天然免疫识别，最终促进HEV的复制。该发现阐明了HEV利用细胞骨架重塑逃逸宿主防御的新机制，为理解HEV致病机制提供了新视角。
HEV抑制FLNa表达
研究通过生物信息学分析、临床样本（肝癌患者肝组织）、动物模型（BALB/c小鼠）和细胞模型（HepG2、Huh7、LX2细胞）证实，HEV感染在体内外均显著抑制细胞骨架蛋白细丝蛋白A（FLNa）的表达。蛋白互作（PPI）网络分析显示，HEV感染导致大量细胞骨架相关差异表达蛋白（DEPs）下调。在HEV感染者肝组织中，FLNa表达与HEV病毒载量呈显著负相关。
HEV感染在体外抑制FLNa表达
体外实验进一步验证，HEV感染HepG2细胞后，从12小时（hpi）至72 hpi，FLNa的mRNA和蛋白水平均被显著抑制。免疫荧光和Western blot结果显示，这种抑制具有时间依赖性。此外，多种HEV基因型（GT1 Sar-55, GT3 Kernow-C1/p6/JDY5, GT4 KM01）感染均能引起明显的细胞病变效应（CPE），表明FLNa下调导致的细胞骨架破坏是HEV感染的一个重要特征。
HEV解旋酶与FLNa相互作用
研究发现HEV的解旋酶结构域（Hel）是直接与FLNa相互作用的关键病毒蛋白。免疫共沉淀（Co-IP）和免疫荧光共定位实验证实了HEV Hel与FLNa的结合。利用AlphaFold 3预测了二者潜在的12个相互作用位点。这种相互作用在HEV感染早期（0.5 hpi）即可发生，并在Huh7和LX2等多种细胞系中得到验证。
FLNa敲低促进HEV复制
利用RNA干扰技术敲低FLNa后，HEV在HepG2细胞中的复制显著增强，病毒滴度升高，HEV ORF2蛋白表达增加。同时，另一关键细胞骨架蛋白β-肌动蛋白（β-actin）的表达也随FLNa下调而减少，表明HEV感染通过破坏细胞骨架网络促进自身复制。
HEV感染通过抑制FLNa逃逸NF-κB信号通路识别
机制研究表明，FLNa的敲低或HEV感染本身，均能显著抑制模式识别受体RIG-I和MDA5的表达，并阻碍NF-κB信号通路关键抑制蛋白IκBα的磷酸化（p-I-κBα）和降解，从而阻断NF-κB亚基P65的核转位。使用NF-κB抑制剂QNZ处理或敲低FLNa，均能有效促进HEV复制，证明HEV通过抑制FLNa来逃逸NF-κB通路介导的天然免疫识别。
HEV通过抑制FLNa加剧细胞凋亡并影响泛素化
研究发现，HEV感染或FLNa敲低均可诱导细胞凋亡，且两者叠加效应更显著。TUNEL实验显示HEV感染小鼠肝组织中凋亡增加，且与FLNa表达负相关，抗凋亡蛋白Bcl-2表达下降。此外，HEV感染抑制了K63连接的泛素化，而FLNa敲低则加剧了泛素化介导的降解过程。多色免疫荧光（mIF）证实，在HEV感染的肝组织中，FLNa和K63泛素化水平均降低。然而，通过Transwell共培养体系发现，HEV感染的肝内巨噬细胞（Kupffer细胞）并未通过旁分泌途径显著影响肝细胞FLNa的表达。
讨论
本研究深入揭示了HEV逃逸宿主天然免疫的新机制：病毒通过其解旋酶与宿主细胞骨架蛋白FLNa相互作用，并抑制其表达。FLNa的下调破坏了细胞骨架屏障，并关键性地阻断了NF-κB信号通路的激活，使得病毒能够逃逸免疫识别，从而为其复制创造有利条件。这一发现为了解HEV的生命周期和致病机制提供了新的理论依据，并为开发新的抗病毒策略指明了潜在靶点。
