一种从干腌火腿中提取的新型抗氧化肽DD12（DWPDARGIWHND）通过Keap1-Nrf2-ARE通路减轻由H2O2引起的氧化损伤

《Food Research International》：A novel antioxidant peptide DD12 (DWPDARGIWHND) derived from dry cured ham alleviates H2O2-induced oxidative damage via the Keap1-Nrf2-ARE pathway

干制火腿来源肽段DD12通过激活Keap1-Nrf2-ARE信号通路调控NFE2L2等多靶点抗氧化机制，实验证实其可显著降低MDA和ROS水平并促进Nrf2核转位，为功能性食品开发提供新依据。

　　

南应道|陈思琦|李冠豪|李婷宇|穆白德|王娟|冯健|李红梅|朴春香

吉林延边大学农学院，中国延吉133000

摘要

本研究探讨了干腌火腿提取的肽DD12的抗氧化机制及其对Keap1-Nrf2-ARE信号通路的调节作用。网络药理学分析表明，DD12与多个抗氧化靶点相关；KEGG分析显示它可能调控112条信号通路，尤其是Keap1-Nrf2通路。PPI网络分析确定了五个关键靶点，分子对接实验表明DD12与NFE2L2具有高亲和力。荧光素酶报告基因分析证实DD12能够激活ARE。此外，在H?O?诱导的Caco-2细胞中，DD12提高了SOD、CAT和GSH-Px的活性，同时MDA和ROS水平分别降低了54.46%和67.39%。Western blot分析显示DD12促进了Nrf2向核内的转运，并增加了Nrf2、NQO1和HO-1的mRNA及蛋白表达，降低了Keap1的表达，表明DD12具有抑制H?O?诱导的氧化损伤的作用。因此，DD12通过激活Keap1-Nrf2-ARE通路发挥抗氧化作用。

引言

活性氧（ROS）是有氧代谢的副产物，通常由人体自身的抗氧化系统中和（Hu等人，2024年）。然而，ROS的过度积累会破坏细胞稳态，导致大分子的氧化损伤，并引发心血管疾病和神经退行性疾病等慢性疾病（Wu等人，2024年）。虽然合成抗氧化剂被广泛用于缓解氧化应激，但其潜在的毒性和副作用限制了其应用（Xie等人，2024年；Zhuang等人，2024年）。因此，寻找安全有效的天然抗氧化剂成为研究热点。

食品来源的生物活性肽因其高生物相容性和有效性而成为有前景的天然抗氧化剂（Tao等人，2025年；Zheng等人，2023年）。特别是干腌火腿，富含这类肽。多项研究表明，火腿提取的肽具有显著的自由基清除能力和细胞保护作用（Wang等人，2024年；Wang等人，2024年；Yang等人，2024年；Wei等人，2023年）。然而，以往的研究主要依赖于表型筛选，未能明确其潜在的分子机制和多靶点相互作用。网络药理学为解析肽-靶点相互作用提供了系统的方法（Wang等人，2024年；Wang等人，2024年）。最新研究表明，Keap1-Nrf2-ARE信号通路是氧化防御的核心调节途径。在应激条件下，Nrf2从Keap1解离，转运到细胞核，启动包括NQO1和HO-1在内的细胞保护基因的转录（Gao等人，2024年；Wang等人，2025年）。天然生物活性分子能够促进这一激活过程，从而恢复氧化还原稳态（Wayal等人，2025年；Zhang等人，2021年）。

在我们之前的研究中，从低盐干腌火腿中分离出一种新的肽DD12（DWPDARGIWHND），并证实其具有显著的抗氧化活性（Nan等人，2024年）。然而，其具体作用机制尚不清楚。因此，本研究结合网络药理学和实验验证，详细阐明了DD12的分子机制，特别是其对Keap1/Nrf2-ARE轴的调节作用。这些发现为将DD12作为功能性食品成分的应用提供了理论基础。

试剂和材料

干腌火腿提取的肽DD12购自上海宏肽生物科技有限公司；CCK-8（细胞增殖和毒性检测试剂盒）、还原型谷胱甘肽（GSH）、二甲基砜（细胞培养级）、CAT、SOD、GSH-Px和丙二醛（MDA）检测试剂盒购自Solepol科技有限公司/南京建健生物工程研究所（中国南京）；裂解液、逆转录试剂盒和荧光定量PCR试剂盒购自Tiangen生化公司

确定DD12的潜在抗氧化靶点

通过SEA数据库获得的151个DD12潜在靶点与GeneCards收集的4992个抗氧化相关靶点进行交叉分析，利用Venny平台识别出104个重叠靶点（图1A；表2），表明DD12的抗氧化作用可能通过这些共同靶点实现。

随后使用STRING数据库构建了一个蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络，包含103个节点和456条边，平均节点度为8.85（图1B）。

结论

本研究阐明了干腌火腿提取的肽DD12（DWPDARGIWHND）的抗氧化机制及其对Keap1-Nrf2-ARE信号通路的调节作用。综合网络药理学和分子对接分析表明，DD12通过多靶点和多通路途径激活Keap1-Nrf2-ARE轴，显著减轻氧化应激。机制上，DD12与关键靶点（包括NFE2L2）具有高亲和力结合，并促进Nrf2向细胞核的转运

作者贡献声明

南应道：撰写初稿、实验研究、数据分析、概念构建。陈思琦：撰写初稿、实验研究、数据分析、概念构建。李冠豪：撰写、编辑。李婷宇：方法学设计、数据分析。穆白德：实验研究、数据分析。王娟：实验研究、数据分析。冯健：方法学设计、数据分析。李红梅：撰写、编辑、数据分析。朴春香：撰写、编辑

资助

本研究得到了国家自然科学基金（资助编号：32160574）的支持。

未引用的参考文献

Dong, Yan, Zhang and Dai, 2024

Hong et al., 2023

Huang et al., 2022

Ma et al., 2025

Shi et al., 2023

Wang et al., 2024

Yang, 2024

Yu et al., 2025

Zhao et al., 2024

Zou et al., 2023

利益冲突声明

作者声明没有已知的可能影响本论文工作的财务利益或个人关系。