无需探针的定量聚合酶链反应技术用于特异性检测伤寒沙门氏菌

《Archives of Microbiology》：Specific detection of Salmonella Typhi by probe-free quantitative polymerase chain reaction

本研究开发了一种基于实时荧光定量PCR（qPCR）的直接检测伤寒沙门氏菌的方法，无需DNA提取和细菌培养，可在15小时内完成检测。通过测试101份临床样本，发现5例阳性病例，与实验室记录一致。该方法特异性强、操作简便，为早期诊断提供了快速可靠的新方案。

　　

摘要

伤寒主要由伤寒沙门氏菌引起，仍然是一个严重的全球健康问题，因此需要早期诊断来控制这种病原体的传播。目前用于检测伤寒沙门氏菌的方法需要较长的时间（长达2-3天）才能得出结果，因为这些方法依赖于细菌培养和鉴定。本研究展示了使用定量聚合酶链反应（qPCR）在临床和生物样本中准确、特异性地检测伤寒沙门氏菌的方法。我们描述了一种基于qPCR的方法的开发和验证过程，该方法能够在采集血液样本后的15小时内直接检测出伤寒沙门氏菌。值得注意的是，这种方法无需进行基因组DNA分离和细菌培养，从而显著加快了诊断流程。所使用的引物对针对伤寒沙门氏菌的CdtB基因，能够扩增一段154个碱基对的DNA片段。通过对100多个患者样本的检测，我们发现了5例伤寒沙门氏菌感染病例，其结果得到了临床实验室记录的证实。为了确保qPCR检测的特异性和可靠性，所有实验都进行了三次重复。令人印象深刻的是，所开发的引物对能够明确区分阳性样本和阴性样本。这项发明为当前的诊断方法提供了一种有前景的替代方案，能够实现伤寒的特异性诊断。

图形摘要

伤寒主要由伤寒沙门氏菌引起，仍然是一个严重的全球健康问题，因此需要早期诊断来控制这种病原体的传播。目前用于检测伤寒沙门氏菌的方法需要较长的时间（长达2-3天）才能得出结果，因为这些方法依赖于细菌培养和鉴定。本研究展示了使用定量聚合酶链反应（qPCR）在临床和生物样本中准确、特异性地检测伤寒沙门氏菌的方法。我们描述了一种基于qPCR的方法的开发和验证过程，该方法能够在采集血液样本后的15小时内直接检测出伤寒沙门氏菌。值得注意的是，这种方法无需进行基因组DNA分离和细菌培养，从而显著加快了诊断流程。所使用的引物对针对伤寒沙门氏菌的CdtB基因，能够扩增一段154个碱基对的DNA片段。通过对100多个患者样本的检测，我们发现了5例伤寒沙门氏菌感染病例，其结果得到了临床实验室记录的证实。为了确保qPCR检测的特异性和可靠性，所有实验都进行了三次重复。令人印象深刻的是，所开发的引物对能够明确区分阳性样本和阴性样本。这项发明为当前的诊断方法提供了一种有前景的替代方案，能够实现伤寒的特异性诊断。

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