《Advanced Science》：Cellular Identity Crisis: RD3 Loss Fuels Plasticity and Immune Silence in Progressive Neuroblastoma
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本文系统揭示了视网膜退化蛋白3（RD3）在神经母细胞瘤（NB）恶性进展中的核心作用。研究证实，治疗压力诱导的RD3缺失通过激活上皮-间质转化（EMT）、增强肿瘤干细胞（CSC）特性及重塑肿瘤免疫微环境（TIME），协同推动肿瘤免疫逃逸。RD3功能的恢复可逆转上述表型，重编程细胞分化状态并增强免疫监视。该研究为RD3靶向治疗策略的开发提供了关键理论依据。
1 引言
神经母细胞瘤（NB）作为儿童交感神经系统最常见的恶性实体肿瘤，其高风险病例在现有综合治疗下仍面临极易复发和转移的困境。肿瘤细胞可塑性（cellular plasticity）被视为驱动NB进展的核心动力，其表现包括上皮-间质转化（EMT）、去分化及肿瘤干细胞（CSC）特性的获得。近年研究发现，这种可塑性不仅促进肿瘤的异质化和进化，更直接参与肿瘤免疫编辑（TIME），导致免疫静默型“冷肿瘤”微环境的形成。
本研究聚焦于视网膜退化蛋白3（RD3）——一个在视网膜变性中已知的蛋白，并发现在NB中其表达随疾病进展和治疗压力的增加而显著降低。RD3缺失与NB细胞的身份紊乱、LINEAGE转化及免疫逃逸密切相关，但其具体调控机制及在TIME中的作用尚未明确。
2 材料与方法
2.1 细胞培养
研究使用了14株来自儿童肿瘤学组（COG）库的高风险NB细胞系，包括诊断期（Dx）与进展期（PD）样本，并构建了RD3敲除（RD3?/?）及回补（RD3+/+）的稳转细胞模型。
2.2–2.20 实验方法涵盖范围
包括ELISA、免疫印迹、免疫荧光、流式细胞术、肿瘤球形成实验、Transwell迁移/侵袭实验、染色质免疫共沉淀（ChIP）、Co-IP及体内异种移植模型等，全面评估RD3在NB可塑性及免疫调控中的功能。
3 结果
3.1 RD3缺失诱导NB细胞身份重编程
在临床化疗药物（如长春新碱、顺铂）压力下，NB细胞普遍发生RD3表达下调。RD3缺失显著上调EMT相关标志物（N-钙黏蛋白、Vimentin、Slug），并下调上皮标志物E-钙黏蛋白，同时增强细胞迁移、侵袭及肿瘤球形成能力。
3.2 RD3缺失富集CSC并激活多能性网络
通过ALDH+与CD133、CD114、CD117等多标志物联用，研究发现RD3?/?细胞中具有显著增加的CSC亚群（包括三阳性CD133+CD114+CD117+群体）。此外，RD3缺失导致多能性核心转录因子SOX2、OCT3/4、NANOG的表达上调，且ChIP实验证实RD3可直接结合这些基因的启动子区域，抑制其转录活性。
3.3 RD3恢复逆转细胞可塑性及恶性表型
在RD3回补的PD细胞中，EMT进程被抑制，上皮标志物表达回升，细胞侵袭和干细胞特性显著减弱，说明RD3在维持细胞分化状态中起关键作用。
3.4 RD3调控肿瘤免疫可见性与T细胞功能
RD3缺失导致MHC I类分子（HLA-A/B、β2M）表达下调，免疫检查点分子（如PD-L1、CD276）上调，从而削弱抗原呈递并增强免疫抑制。共培养实验显示，RD3?/?的NB细胞对细胞毒性T细胞（CD8+Tc）的激活能力下降，IFNγ与TNFα分泌减少，而RD3回补能显著恢复T细胞介导的肿瘤杀伤效应。
3.5 RD3影响腺苷能免疫抑制通路
RD3缺失还上调CD73、CD39及A2AR，激活腺苷介导的免疫抑制途径，进一步强化肿瘤的免疫逃逸能力。
4 讨论
本研究系统阐释RD3作为NB细胞可塑性与免疫编辑的交叉节点分子，其缺失通过激活SOX2/OCT3/4/NANOG轴推动CSC特性演进，同时重塑TIME促进免疫静默。这一发现不仅揭示RD3在NB恶性转化中的新功能，也为联合靶向CSC与免疫检查点的治疗策略提供理论依据。未来研究需进一步探索RD3调控免疫及可塑性的上游信号网络，以期开发针对进展性NB的RD3靶向干预手段。
