《Frontiers in Immunology》：Differential expression of complement Properdin and Factor H in the placentae and umbilical cords of mothers with Preeclampsia, Gestational Diabetes Mellitus and Recurrent Pregnancy Loss
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本综述聚焦补体替代通路关键调控因子Properdin（上调因子）和Factor H（FH，下调因子）在子痫前期（PE）、妊娠期糖尿病（GDM）及复发性流产（RPL）患者胎盘与脐带中的表达谱。研究通过组织学、RT-qPCR、蛋白质印迹（WB）及免疫组化（IHC）技术，揭示了Properdin在三种疾病胎盘组织中均显著上调，而FH在PE和RPL中下调、在GDM中上调的差异性表达模式，并关联检测了C3、C5水平，为理解补体系统失衡在妊娠并发症中的作用提供了新视角，提示其作为潜在生物标志物或治疗靶点的可能性。
背景
补体系统是先天免疫的重要组成部分，在妊娠和分娩过程中扮演关键角色。Properdin和Factor H (FH) 是补体替代通路（Alternative Pathway, AP）中两个作用相反的调控蛋白：Properdin通过稳定C3转化酶（C3bBb）来上调AP活性，促进炎症反应；而FH则通过降解C3b、抑制C3转化酶形成来负向调控AP，防止过度炎症和组织损伤。胎盘和脐带（Umbilical Cord, UC）作为母胎界面的重要结构，其局部补体平衡对维持正常妊娠至关重要。本研究旨在探讨Properdin和FH在子痫前期（Preeclampsia, PE）、妊娠期糖尿病（Gestational Diabetes Mellitus, GDM）和复发性流产（Recurrent Pregnancy Loss, RPL）患者胎盘及脐带组织中的表达差异，以揭示补体调控失衡在这些妊娠并发症中的潜在作用。
材料与方法
研究设计及样本采集于2020年至2024年间，从印度西孟加拉邦的Maharaja Jitendra Narayan医学院附属医院招募20-30岁的孕妇。共设立四个研究组：PE组（n=6）、GDM组（n=4）、RPL组（n=4）和正常健康妊娠（Normal, N）对照组（n=6）。PE、GDM和RPL的诊断均遵循相关国际指南。收集足月（PE、GDM、N组）或早孕期（RPL组）的胎盘（包括绒毛膜绒毛和蜕膜）及脐带组织。部分组织用于RNA和蛋白质提取，部分进行福尔马林固定用于组织学分析。
组织学分析采用苏木精-伊红（H&E）和Masson三色（MT）染色观察组织形态和胶原沉积。基因表达水平通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测Properdin和FH的mRNA水平，以β-肌动蛋白（β-actin）作为内参基因，采用ΔΔCT法进行相对定量。蛋白质表达水平通过蛋白质印迹（Western Blot, WB）分析Properdin、FH以及补体成分C3和C5的含量，使用ImageJ软件进行光密度定量分析，以α-微管蛋白（α-tubulin）或β-肌动蛋白标准化。免疫组织化学（IHC）用于定位和半定量分析Properdin和FH在胎盘组织中的表达分布，通过IHC profiler插件计算H评分。统计学分析采用非参数Mann-Whitney检验，p < 0.05认为有统计学意义。
结果
组织病理学特征：与正常胎盘（N）相比，PE和GDM胎盘显示胎儿毛细血管增厚、大量纤维素样沉积和合体细胞结增多。MT染色显示PE和GDM胎盘胎儿毛细血管周围和绒毛间质内有致密的胶原沉积（蓝色），提示纤维化病变。RPL胎盘（早孕期）则显示蜕膜内血管扩张、纤维素样沉积和绒毛间出血，并伴有广泛的胶原沉积。
Properdin和FH的mRNA表达：在胎盘组织中，PE和GDM组的Properdin mRNA表达均显著高于N组。FH mRNA在PE胎盘中显著低于N组，而在GDM胎盘中显著高于N组。在脐带组织中，PE-UC和GDM-UC的Properdin mRNA表达也显著高于正常脐带（N-UC）。FH mRNA在PE-UC中显著降低，在GDM-UC中显著升高。
Properdin和FH的蛋白表达：WB结果与mRNA趋势一致。PE和GDM胎盘组织的Properdin蛋白水平显著高于N组。FH蛋白在PE胎盘中显著降低，在GDM胎盘中显著升高。在脐带组织中，PE-UC和GDM-UC的Properdin蛋白水平与N-UC相比无显著差异；而FH蛋白在PE-UC中显著降低，在GDM-UC中显著升高。
免疫组化定位：IHC显示，Properdin在PE和GDM胎盘的合体滋养层和合体细胞结区域表达强度显著高于N组。FH在PE胎盘中表达极低，几乎检测不到；而在N和GDM胎盘中，FH定位于合体滋养层、胎儿血管内皮和绒毛间质。GDM胎盘同时呈现高Properdin和高FH表达。
补体成分C3和C5的表达：在胎盘组织中，PE组的C3和C5蛋白水平均显著高于N组，提示补体过度激活。GDM胎盘的C3和C5水平与N组无显著差异。在脐带组织中，PE-UC和GDM-UC的C3蛋白水平均显著低于N-UC，而C5蛋白水平在三组间无显著差异。
RPL样本分析：与足月健康胎盘（N）相比，早孕期RPL胎盘的Properdin、C3和C5蛋白表达显著升高，而FH的mRNA和蛋白水平均显著降低，其模式与PE相似，提示补体激活失调。
讨论
本研究发现Properdin在PE、GDM和RPL胎盘组织中均显著上调，这可能加剧局部的炎症环境。PE和RPL胎盘的特征是Th1/Th2细胞因子失衡、中性粒细胞浸润及中性粒细胞胞外诱捕网（NETosis）增加，活化的中性粒细胞是Properdin的重要局部来源。Properdin的过表达可通过稳定C3转化酶放大替代通路，导致C3a、C5a等过敏毒素生成和膜攻击复合物（MAC）形成，促进炎症和组织损伤。在PE和RPL中，伴随Properdin上调的是FH的下调和C3/C5的升高，明确指向补体替代通路的过度激活。
然而，在GDM中观察到不同的模式：尽管Properdin升高，但FH同样升高，而C3和C5水平未见显著变化。这表明GDM中的补体可能未发生经典途径的过度激活。GDM与代谢紊乱、胰岛素抵抗密切相关，脂肪组织也可产生FH。GDM中FH的上调可能是一种保护性反应，以抑制补体激活，而Properdin的升高可能通过补体非依赖性途径发挥作用，例如直接作为调理素或与自然杀伤（NK）细胞受体相互作用，参与免疫调控。
研究的局限性包括RPL组缺乏孕周匹配的对照（使用足月胎盘作为对照），样本量相对较小，以及未进行功能性补体活性测定。然而，本研究首次在三种重要妊娠并发症中平行比较了Properdin和FH的表达，揭示了其在母胎界面补体平衡调控中的差异性，为未来探索其作为诊断标志物或治疗靶点（例如，针对Properdin的抑制或FH的补充疗法）奠定了基础。
结论
Properdin在PE、GDM和RPL胎盘中的高表达可能加剧胎盘炎症反应，参与疾病病理过程。FH在PE和RPL中的低表达可能导致补体替代通路调控失效和过度激活，而在GDM中的高表达则可能起到补偿性保护作用。因此，Properdin和FH的平衡对维持正常妊娠至关重要，其表达失调是妊娠并发症的重要特征。深入阐明其调控机制有望为PE、GDM和RPL的补体靶向干预策略提供新思路。
