《Journal of Obstetrics and Gynaecology》：DNA methylation triage of human papillomavirus-positive atypical squamous cells of undetermined significance in cervical cancer screening
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本研究发现多基因DNA甲基化检测（PAX1/EPB41L3/FAM19A4）对HPV阳性ASC-US（非典型鳞状细胞）患者具有优异的分流效能：CIN2+（宫颈上皮内瘤变2级及以上）检测灵敏度达85.19%，特异性96.43%，可避免96.43%的低风险患者接受不必要的阴道镜检查，尤其在≥30岁人群中表现突出（AUC 0.91-0.97），为优化宫颈癌筛查路径提供了精准解决方案。
Abstract
背景
人乳头瘤病毒（HPV）阳性伴非典型鳞状细胞（ASC-US）女性的分流管理是宫颈癌筛查中的长期临床挑战，传统策略常导致过度阴道镜转诊。研究对195例HPV阳性ASC-US女性开展诊断性队列研究。
方法
对残留宫颈脱落细胞进行多基因DNA甲基化分析，以阴道镜引导活检和/或宫颈管取样组织学为金标准，旨在最小化阴道镜转诊。
结果
PAX1、EPB41L3和FAM19A4甲基化水平从≤CIN1到CIN2、CIN3及宫颈癌逐步升高，三者ΔCt值从≤CIN1到CIN3均显著下降。对于CIN2+检测，检测灵敏度为85.19%，特异性96.43%，阳性预测值（PPV）79.31%，阴性预测值（NPV）97.59%，受试者工作特征曲线下面积（AUC）0.91，可避免96.43%的阴道镜转诊。对于CIN3+，灵敏度、特异性、PPV、NPV和AUC分别为94.44%、93.22%、58.62%、99.4%和0.94。分层分析显示，在HPV16/18阳性与非16/18高危HPV女性中，检测灵敏度、特异性和AUC相当且均较高。≥30岁女性诊断效能最优，而<30岁女性性能欠佳。
结论
宿主多基因DNA甲基化检测对HPV阳性ASC-US女性分流具有高特异性和良好灵敏度，有望在保持高级别病变检测能力的同时减少阴道镜转诊，尤其在≥30岁人群中。
引言
宫颈癌是女性第四大常见癌症，99%以上宫颈癌前病变和大多数浸润癌与持续性HPV感染相关。世界卫生组织推荐HPV DNA检测作为30-64岁无症状女性初级筛查策略。ASC-US是最常见的细胞学异常，HPV阳性ASC-US女性构成中危人群，其管理存在争议。宿主DNA甲基化是癌变早期基因沉默的表观遗传机制，多个甲基化标志物显示风险分层潜力。本研究评估多基因DNA甲基化组合作为该人群二次分流工具的临床性能。
方法
参与者与设计
研究纳入2022年10月至2025年2月期间在苏州市吴中人民医院门诊机会性筛查中接受HPV和细胞学检测的女性。入选标准包括HPV阳性且细胞学提示ASC-US、有足够残留细胞用于甲基化检测、计划接受阴道镜检查。排除标准包括HPV阴性、残留细胞不足、既往宫颈治疗史、宫颈癌或其他恶性肿瘤史等。
样本采集
细胞学和HPV检测样本采用专用宫颈刷采集。阴道镜引导活检在可疑病变处取样，未见异常时标准化取样。
实验室与病理分析
高危HPV检测采用荧光PCR法。细胞学检查按Bethesda系统报告。DNA甲基化检测针对PAX1、EPB41L3和FAM19A4及内参基因ACTB，通过实时PCR进行。组织学诊断按WHO 2020标准分类。
统计分析
使用MedCalc和SPSS软件分析，计算灵敏度、特异性等指标。
结果
甲基化水平与病变等级
PAX1、EPB41L3和FAM19A4甲基化水平随病变严重程度逐步升高，ΔCt值从≤CIN1到CIN3显著下降。
CIN2+检测性能
甲基化检测对CIN2+的灵敏度85.19%，特异性96.43%，PPV 79.31%，NPV 97.59%，AUC 0.91。检测阳性率14.87%，96.43%的非CIN2+女性甲基化阴性。
CIN3+检测性能
对CIN3+的灵敏度94.44%，特异性93.22%，PPV 58.62%，NPV 99.4%，AUC 0.94。
HPV型别与年龄分层
在HPV16/18与非16/18高危HPV女性中性能相当。≥30岁女性性能优异（灵敏度85.70%-100%，特异性≥94.44%，AUC 0.93-0.97），而<30岁女性性能较低（灵敏度33.33%，AUC 0.64）。
讨论
多基因甲基化检测在HPV阳性ASC-US女性中展示优异分流效能，甲基化水平与病变等级正相关。其性能优于单基因或双基因检测，且不受HPV型别影响。≥30岁女性中表现突出，可能与感染持续时间较长有关。该检测采用常规细胞学样本，标准化高，周转时间短，临床可接受性强。高NPV有助于减少不必要的阴道镜转诊。研究局限性包括缺乏长期随访数据、样本量较小、机会性筛查人群可能限制结果外推。
结论
多基因DNA甲基化检测对HPV阳性ASC-US女性分流具有高特异性和良好灵敏度，能有效减少阴道镜转诊，且在≥30岁女性中表现最优，支持其作为该人群靶向分流工具。
