中国丁型流感病毒株D/JY3002反向遗传操作系统的构建与功能验证

　　

摘要：

目的 当前中国牛群中流行的丁型流感病毒多属D/Yama2019遗传进化谱系，构建此遗传进化谱系丁型流感病毒的反向遗传操作系统，为深入探究其复制与致病机制提供研究工具。 方法 以中国丁型流感病毒株D/bovine/CHN/JY3002/2022（简称D/JY3002，属D/Yama2019遗传进化谱系）为研究材料，将编码该病毒主要抗原血凝素-酯酶-融合蛋白（hemagglutinin-esterase-fusion, HEF）的基因组节段对应的DNA片段，无缝克隆至经设计改造的双向表达载体pCC1-DualPro中；其余基因组节段对应的DNA片段，则无缝克隆至常用双向表达载体pHW2000中。随后经改进优化的操作步骤，拯救出重组丁型流感病毒。 结果 拯救的丁型流感病毒株（rD/JY3002）与天然分离的中国丁型流感病毒株（D/JY3002）在复制能力上表现相当，且二者复制动力学特征相仿。rD/JY3002至少可稳定传代5代。利用已建立的反向遗传操作系统，拯救出携带绿色荧光报告基因GFP以及其他遗传进化谱系（D/OK和D/660）丁型流感病毒HEF基因的重组丁型流感病毒，分别命名为rD/JY3002-GFP、rD/JY3002-D/OK-HEF和rD/JY3002-D/660-HEF，证实了不同遗传进化谱系的丁型流感病毒间可发生基因组节段重配。 结论 建立了高效、稳定的中国丁型流感病毒株反向遗传操作系统，该系统可用于进一步开发以丁型流感病毒为载体的外源基因呈递技术。