《Transboundary and Emerging Diseases》：Bandavirus dabieense Isolated From a Wild Leopard Cat (Prionailurus bengalensis euptilura) in the Republic of Korea
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本文首次报道从韩国野生豹猫（Prionailurus bengalensis euptilura）脾脏中成功分离出严重发热伴血小板减少综合征病毒（SFTSV），通过实时荧光定量PCR（RT-PCR）、病毒分离、免疫荧光试验（IFA）及全基因组测序技术，证实该毒株属于B-1亚基因型，与当地家猫及人源毒株高度同源（核苷酸同源性99.81%–99.94%）。研究首次发现豹猫源毒株在M片段（编码Gn/Gc糖蛋白）和S片段（编码非结构蛋白NSs）存在独特氨基酸突变（C12Y、H518Q、F118S），为SFTSV在野生动物宿主中的适应性进化提供关键分子证据，凸显野生猫科动物作为蜱媒病毒传播生态指示器的重要性。
引言
严重发热伴血小板减少综合征（SFTS）是由班达病毒大别ense（SFTSV）引起的蜱媒人兽共患病，其病毒为负链RNA病毒，属于白纤病毒科（Phenuiviridae）班达病毒属。自2009年在中国首次报道以来，SFTSV已在韩国、日本等东亚地区形成地方性流行，韩国累计病死率达18.2%。除蜱虫叮咬外，家猫（Felis catus）直接传播SFTSV至人类的案例已被证实，表明猫科动物在病毒传播链中扮演重要角色。然而，对野生猫科动物（如韩国野生豹猫）感染SFTSV的研究尚属空白。本研究首次从韩国野生豹猫体内分离SFTSV并进行全基因组解析，为揭示病毒在自然宿主中的遗传特征及生态传播风险提供关键数据。
材料与方法
样本来源与伦理
研究样本为2024年10月在韩国忠清南道山区发现的死亡幼年豹猫脾脏组织。因属野生动物自然死亡个体，未涉及伦理审批。病毒分离实验经全北大学生物安全委员会批准（IBC编号JBNU 2025-06-001），全程在BL-3实验室完成。
病毒检测与分离
脾组织样本经匀浆后，通过实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测SFTSV的M和S片段，Ct值分别为25.996和24.873，提示脾脏中病毒RNA载量较高。随后使用Vero E6细胞进行病毒分离，接种第3代培养物后，通过巢式PCR和免疫荧光试验（IFA）验证病毒复制。IFA采用SFTSV阳性韩国水鹿血清作为一抗，FITC标记的兔抗鹿IgG为二抗，成功观察到病毒抗原的特异性胞质荧光。
全基因组测序与分析
对第3代病毒培养物进行全基因组测序，采用Illumina平台建库，经质量过滤和de novo组装后获得L（6277 bp）、M（3378 bp）、S（1647 bp）片段完整序列（GenBank登录号PV816800-PV816802）。通过MEGA 7软件进行系统发育分析和氨基酸序列比对，以人类参考毒株HB29（基因型D）及不同宿主的B亚基因型毒株为参照，评估核苷酸/氨基酸同源性及突变位点。
结果
病毒分离与鉴定
巢式PCR和IFA证实SFTSV在Vero E6细胞中成功复制。系统发育分析显示，豹猫源毒株与韩国家猫及人源B-1亚基因型毒株聚为一支，核苷酸同源性达99.81%–99.94%，氨基酸同源性为99.65%–99.95%。相较于基因型D参考毒株HB29，豹猫毒株核苷酸同源性为93.08%–95.80%。
独特氨基酸突变
豹猫毒株在M片段编码的单肽（C12Y）和Gc糖蛋白（H518Q）、S片段编码的非结构蛋白NSs（F118S）位点发现3个独有突变。与其他宿主（如猎豹源B-2亚型、家猫源B-3亚型）毒株相比，这些突变未在同类基因型中出现，提示野生豹猫作为特殊宿主可能驱动SFTSV的适应性进化。
讨论
本研究首次证实野生豹猫可作为SFTSV的自然感染宿主，且病毒可能与其死亡相关。独特氨基酸突变位点（如Gc糖蛋白的H518Q）可能影响病毒侵入机制，而NSs蛋白的F118S突变或许与免疫调节功能相关。豹猫栖息地（山区灌丛及溪流附近）为蜱虫活跃区域，进一步支持野生动物在SFTSV自然循环中的枢纽作用。尽管未观察到显著病理损伤，但高病毒载量提示豹猫可能为SFTSV的敏感宿主。研究强调需通过“一体化健康（One Health）”策略加强野生动物监测，以预警SFTSV跨物种传播风险。
结论
从韩国野生豹猫成功分离SFTSV并完成全基因组解析，为首次在野生猫科动物中实现该病毒的系统生物学研究。独有氨基酸突变揭示了病毒在野生动物宿主中的潜在适应性进化，凸显野生豹猫作为SFTSV传播生态指示物种的价值。未来需扩大野生动物监测网络，深化病毒-宿主互作机制研究。
